lhx8在海马胆碱能神经再生中的作用

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1、Lhx8在海马胆碱能神经再生中的作用研究生姓名指导教师姓名人体解剖与组织胚胎学中枢神经发育与再生苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体s均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名s日苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即S学位论文著作权

2、归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在_____年__月解密后适用本规定。非涉密论文0论文作者签名；^日期：〜r.Lhx8在海马胆碱能神经再生中的作用中文摘要Lhx8在海马胆碱能神经再生中的作用中文摘要LIM

3、同源盒基因（LIMhomeoboxgene）家族成员之一的Lhx8与胚胎时期胆碱能神经元的发育有关，但是对于其在海马胆碱能神经再生中的作用及诱导其上调的机制尚未见有报道。本课题研究内容主要包括四个方面：1、切割穹窿海马伞后海马内Lhx8的表达变化及与ChAT阳性神经元的共定位；2、过表达Lhx8促进海马神经干细胞向胆碱能神经元分化；3、沉默Lhx8抑制海马神经干细胞向胆碱能神经元分化；4、NGF上调Lhx8促进海马NSCs向胆碱能神经元分化的信号通路研究。一．目的：观察切割穹窿海马伞后Lhx8蛋白表达的时相变化及与ChAT的表达共定位情况，过表达

4、和沉默Lhx8后对NSCs分化为胆碱能神经元的影响，明确Lhx8与海马胆碱能神经再生是否有关；探讨NGF上调Lhx8促进海马NSCs向胆碱能神经元分化的可能信号通路。二．方法：（1）制备切割右侧穹窿海马伞大鼠模型，分别于术后第1d、3d、7d、14d、21d、28d检测Lhx8蛋白表达情况，并检测Lhx8蛋白表达量最高的第7d时Lhx8与ChAT的共定位情况；（2）体外培养海马NSCs，并加入切割穹窿海马伞海马提取液，将Lenti6.3-Lhx8重组慢病毒转染至培养的细胞中，观察海马NSCs向胆碱能神经元分化情况，检测Lhx8和ChAT的基因和蛋

5、白表达变化；（3）将Lenti6.3-Lhx8重组慢病毒注入正常侧及切割穹窿海马伞侧大鼠海马齿状回中，观察海马齿状回中新生ChAT阳性的胆碱能神经元的表达和定位，检测Lhx8和ChAT的基因及蛋白的表达情况；（4）联合应用切割穹窿海马伞海马提取液及NGF培养海马NSCs，转染Lhx8干扰慢病毒，观察海马NSCs向胆碱能神经元分化情况，并检测Lhx8和ChAT的基因和蛋白表达变化；I中文摘要Lhx8在海马胆碱能神经再生中的作用（5）大鼠侧脑室灌注NGF提高海马ChAT活性，将Lhx8干扰慢病毒分别注入正常侧及切割穹窿海马伞侧大鼠海马齿状回中，观察海

6、马齿状回中新生ChAT阳性的胆碱能神经元的表达和定位，检测Lhx8和ChAT的基因及蛋白的表达情况；（6）应用NGF促进体外培养海马NSCs向胆碱能神经元分化，加入信号通路抑制剂，检测各通路中效应蛋白磷酸化水平、Lhx8基因和蛋白表达变化，观察使用信号通路抑制剂后海马NSCs向胆碱能神经元分化情况。三．结果：（1）切割穹窿海马伞后随着时间延长，Lhx8蛋白的表达量逐步增高，且第7d时蛋白表达量达到高峰，此后逐渐下降。切割穹窿海马伞后第7天海马齿状回颗粒下层和门区中出现Lhx8阳性细胞，其数量和平均光密度明显高于正常侧，同时出现Lhx8/ChAT双

7、标阳性细胞；（2）海马NSCs转染Lenti6.3-Lhx8重组慢病毒后，分化为MAP2阳性神经元的数量没有明显增加，但能提高ChAT阳性细胞占MAP2阳性神经元的比例，Lhx8和ChAT的基因及蛋白的表达量也明显增高，说明上调Lhx8能够促进海马NSCs向胆碱能神经元分化；（3）重组慢病毒Lenti6.3-Lhx8能明显提高正常海马齿状回内新生的ChAT/Lhx8阳性胆碱能神经元数量，将Lenti6.3-Lhx8重组慢病毒注射至切割穹窿海马伞海马齿状回中，发现新生的Lhx8阳性的胆碱能神经元的数量更多，Lhx8和ChAT的基因及蛋白的表达量也明

8、显增高，说明切割穹窿海马伞且上调Lhx8，可明显地促进海马内的胆碱能神经再生水平；（4）海马NSCs转染Lhx8干扰慢病毒后，分化为Ch