th17细胞相关因子的表达纯化及吸附评价

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1、犬；１嫂－大學ＤＡＬＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＩＡＮＵＮ工兩１硕士字位论文ＭＡＳＴＥＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＡｆｉＴｈｌ７细胞相关因子的表达纯化及吸附评价工程领域里整工１作者姓名妾ｉ￡：＆＿指导教师＿＿＿２５６答辩日期—Ｐ＿Ｌ＿＾＿＿Ｊ．专业学位硕士学位论文Ｔｈｌ７细胞相关因子的表达纯化及吸附评价－ＥｘｒｅｓｓｉｏｎｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｏｆＴｈｌ７ｃｅｌｌｒｅ

2、ｌａｔｅｄｐ，ｐｆａｃｔｏｒｓ作者姓名：李庄合工程、领域：生物工程学号：３１３１８０２９指导教师：贾凌云完成日期：２０１５年６月大ｉ理工大摩ＤａｌｉａｎｅｃｈｎｏｌｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｇｙ大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中巳经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体巳经发表的研究成果，也不包含其他巳申请学位或其

3、他用途使用过的成果一。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均巳在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。“／Ｔ／ｉ学位论文题目：７命ｆｅ相各於毛么私辦Ｋ＞作者签名；／ｒ年《月日：本日期：大连ａｘ大学专业学位硕士学位论文摘要自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病，该疾病的发病机理比较复杂，尚未研宄清楚，目前临床上还没有有效成熟的治疗方法一。之前直认为自身免疫性疾病与机体内Ｔ辅助细胞的两

4、个亚群Ｔｈｌ细胞和Ｔｈ２细胞有关，当这两个亚群相互作用失去平衡即引起疾病的产生，但是随着研究的深入，一一种新的细胞亚群发现这种传统观念无法解释些疾病的发生发展，而相应的（ＴＭ７细胞亚群）的发现能很好的解释许多疑惑，，这种新的细胞亚群打破了之前的传统概念被发现与自身免疫性疾病有着更为密切的关系，近些年来受到了很多研究学者的关注。－－Ｔｈｌ７细胞主要相关效应因子、Ｉ、－为ＩＬ１７Ｌ６ＴＯＦａ，从临床上疾病治疗角度出发，关于Ｔｈｌ７细胞相关因子的检测与去除具有重要的实际意义。本论

5、文对Ｔｈｌ７细胞的主要效应相关因子进行表达纯化：，然后通过典型吸附剂对其吸附评价。具体的研宄内容有（ＴＮＦ－ａ的表达纯化－－１）。构建表达载体ｐＥＴ２３ａＴＮＦａ，转入宿主ＢＬ２１（ＤＥ３）。中，通过ＩＰＴＧ诱导进行蛋白表达通过优化条件白：ＬＢ培，得到蛋最优表达条件为养°％基培养菌体，３７Ｃ，１７５ｒｐｍ活化１２ｈ，以１接种量转接放大培养３ｈ，用Ｏ．ｌｍＭＩＰＴＧ诱导培养４ｈ，目的蛋白的表达量约为１．２ｍｇ／ｍＬ，占总蛋白５６％。将菌体超声破碎，０－．２％ＰＥＩ

6、（ｗ／ｗ）沉淀，４０％饱和硫酸铵沉淀，ＮｉＮＴＡ亲和树脂层析后９５％，样品纯度达以上。－－－－（２）ＩＬ６。－－，ＩＬ１７Ａ／１７Ｆ的表达通过构建表达载体ｐＰＩＣ９ＫＩＬ６，ＰＩＣ９ＫＩＬ１７Ａ，ｐＰＩＣ９Ｋ－ＩＬ－和Ｐ１７Ｆ，电转入ＧＳ１１５宿主体内，通过ＲＤＢ培养基，ＭＭ／ＭＤ培养基，ＰＣＲ＋＋ｓＭｕｔ３－扩增蹄选鉴定Ｈｉ表型，对阳性转化子用ＹＰＤ培养基于（ｒＣ，２２５ｒｐｍ活化１４１６ｈｒＣｍ培养至ＯＤ－，以１％接种量转入ＢＭＧＹ培养基于３（，２２５ｒｐｅｏ

7、ｏ为２６，接着转入°ＢＭＭＹ培ＯＤｍ培一养基使ｆｉｃｏ为１左右，２５Ｃ，２２５ｒｐ养９６ｈ，每２４ｈ甲醇诱导次，诱－－６导量为终浓度１％，ＩＬ诱导后表达，ＩＬ１７Ａ和１７Ｆ尚未证实有表达。（３）聚苯乙稀型吸附剂对炎症因子的吸附评价。通过吸附动力学和吸附等温线研－ａ吸附速究，证实吸附剂对ＴＮＦ率较快，约２ｈ即接近最大吸附值。聚苯乙烧型吸附剂－ａ的亲和／ｍ与ＴＮＦ５７ｍＬ，即９常数为ｇ．７Ｘ１０５Ｌ／ｍｏｌ，平衡解离常数（Ｋｄ）为０．０１８ｍ／ｍＬ（８４５－ｍ）．４９

8、ｉ／ＩＬ６同。ｇ，最大理论结合容量Ｑ为＾ｇｇ，吸附剂对样具有吸附性通过论文研究，获得了Ｔｈｌ７细胞主要相关因子的表达纯化方法，探索了典型吸附剂对炎症因子的吸附性能，为自身免疫性疾病的相关研究奠定了良好的基础。关键词：自身免疫性疾病；Ｔｈｌ７细胞肿瘤坏死因子；白介素６白介素１７Ａ／Ｆ；；－－ＩＴｈｌ７细胞相关因子的表达纯化及吸附评价Ｅｘｒｅｓｓｏｎｕｒ－ｉｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄａｄｓｏｒｔｉｏｎｏｆＴｈｌ７ｃｅｌｌｒｅｌａｔｅｄｆａｃｔｏ