不同亚型ogt多克隆抗体的制备与特异性分析

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1、鷄寸巧ｉ各义聲（ＫＴＡＮ１ＮＩＶＳＯＫ＼八ＩＲｎＶ（…硕±学位论文ＭＡＳＴＥ艮ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ不同亚型ＯＧＴ多克隆抗体的制备与论文题目：特昇性分祈ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＣｈａｒａｃ化ｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＰｏｌｙｃｌｏｎａｌ英文题目：ＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＡｇａｉｎｓｔＤｉｆｆｅｒｅｎｔＩｓｏｆｏｒｍｓｏｆＯＧＴ作者：巧导數师：顾玉超副教授学位类别：全日制学术学位专业名称：生药学研究方向：分子生物学’—厂ｒ＊ｖｉ？－＊４＇—■－

2、一■—心〇＾去巧心狂培娃狂这公一谨从此论文献给所有关心我和帮助我的人！张迪不同亚型ＯＧＴ多克隆抗体的制备与特异性分析学位论文答辩日期：朱主月Ｗ指导教师签字：主＾节答辩委员会成员签字：＾叢嫌、独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指量下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了义中特别加Ｗ标巧和效谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含水获得（注：如没有其他需要特一别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或化书使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己

3、在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签羊Ｈ期：奶年月曰（＾；学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意Ｗ下事项：１．学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被杳阅和借阅。２．学校可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ乂用影印、缩印或扫描等复制于－段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学＂＂中国学术期刊－（光盘版）电子余志社用ｙ出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授权中齒科学技术信息研充所将本学化论文收录到《中国学位

4、论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字Ｍ期：：円签；／／的权午＾月字旧期：巧月［１（不同亚型ＯＧＴ多克隆抗体的制备与特异性分析摘要－ＯＧ－－一ｌｃＮＡｃ（０ｌｉｎｋｅｄＮａｃｅｔｌｌｕｃｏｓａｍｙｇｉｎｅ）糖基化修饰是种细胞内动态－的虫白质翻后修怖。ＯＧ－－ｌｃＮＡｃ糖基转移酶（ＯｌｉｎＪｃｅｄＮａｃｅｌ巧Ｉｇｕｃｏｓａｍｉｎｅｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ－，ＯＧＴ）瓜ＰＧ－ｌｃＮＡｃ作为供体底物，将单个Ｎ己酷葡萄糖胺－（Ｎａｃｅｔｙｌｇｉ

5、ｕｃｏｓａｍｉｎｅ，ＧｌｃＮＡｃ）与蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的泻基形成〇－糖昔键－，而这种修饰的去除是由糖巧酶〇Ｇ（］ｃＮＡｃａｓｅ，ＯＧＡ）完成的。细胞内超过３０００种蛋白具有Ｏ－ＧｌｃＮＡｃ－修饰，０ＧｃＮＡｃｌ修饰参与了细胞信号转导、配受体相互作用、病毒感染、转录调节、细胞分化、细胞应答Ｗ及蛋白质翻译与降解等生物过程。不仅如此，近年来的很多研巧结果表明，蛋白质〇－Ｇ１ｃＮＡｃ修饰的异常与糖巧病、神经退行巧疾病、癌症等多种重大疾病的发生有密切关系。人类的基因组中只存在一个编码ＯＧＴ的基因，其基因表达产物主要有３种ＯＧＴ亚型，分

6、另ｉｊ为ｎｃＯＧＴ（ｎｕｃｌｅｏｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃＯＧＴ）、ｍＯＧＴ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｌｒｉａ０ＧＴ）、ｓＯＧＴ（ｓｈｏｒｔＯＧＴ）。这二种亚型ＯＧＴ上耍的不同是Ｎ－末端的ＴＰ民ｓ结构，其中，ｎｃＯ最长的亚型是ＧＴ，它的Ｎ端包含１２个ＴＰＲｓ；较短的亚型是ｍＯＧＴ，它的Ｎ端包含９个ＴＰ民ｓ？’并甘有段信号化将其定位于线粒体膜内；最短的〇Ｇ下亚型是ｓＯＧＴ，它仅有２．５个ＴＰＲｓ。但是，这几种ＯＧＴ亚型的Ｃ末端的催化结构域却是相同的。目前，有关化ＧＩｃＮＡｃ修饰及ＯＧＴ的研究进展较慢，其主耍原因就是缺少有利的研究具－；

7、因此，为／进步探讨ＯＧＴ的生理和病理作用，需制备能高效特异性检测ＯＧＴ的抗体。因所有Ｈ个ＯＧＴ亚型包含相同的催化结构域，故为制备能够同时有效识别３种ＯＧＴ亚型的抗体，我们选择丫ＯＧＴ的催化结构域为抗原片段，制备抗ＯＧ－Ｔ－Ｃ抗体步研究ｍＯＧＴ在线粒体中的功能。为进，我们选取ｍＯＧＴ的Ｎ末端的特异性氨基酸序列为抗原片段制备能够特异性识别ｍＯＧＴ的抗体，从而为ｍＯＧＴ的研究提供有利的；］；具。为了制备抗ＯＧＴ－Ｃ抗体，ＮＣＢ本研究在Ｉ数据库中，查找人源ＯＧＴ基因序列，根据ＯＧＴ的结构特点－，选取ＯＧＴ的Ｃ末端催化结构域中的段多狀序

8、列＾５６－１０４６位点氨基蔽）做抗