低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的诱导实验研究

《低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的诱导实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、、考SOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文论文题目低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核____________细胞分化的诱导实验研究___________研究生姓名___________________汪智文________________指导教师姓名___________________姜为民________________专业名称__________________骨外科学______________研究方向__________________脊柱外科______________论文提交日期2015年5月指导小组

2、成员：王根林副教授施勤畐教授李斌教授罗宗平教授李雪峰讲师本课题受江苏省自然科学基金青年项目（BK20130274)、江苏省骨科临床医学研究中心、江苏省骨科临床医学中心、江苏省高校优势学科建设工程资助项目等资助。苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的

3、法律责任。论文作者签名:日期：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在____年_月解密后适用

4、本规定。非涉密论文这"论文作者签名:二日期：导师签名：日期:.夕全，乙,低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的诱导实验研究中文摘要低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的诱导实验研究中文摘要第一部分人退变髓核组织来源间充质干细胞的分离、培养及鉴定【摘要】目的目的：目的：：：体外分离、培养及鉴定人退变髓核组织来源的间充质干细胞（NP-MSCs）并观察其生物学特性。方法方法：方法：：：收集10例腰椎间盘退行性疾病患者的髓核手术标本，采用0.05％II型胶原酶消化加贴壁法分离髓核间充质干细胞并体外培养和扩增。用倒置相

5、差显微镜观察人髓核间充质干细胞形态、流式细胞仪检测干细胞表型分子、定向诱导人髓核间充质干细胞成脂、成骨及成软骨分化。结果结果：结果：：：采用0.05％II型胶原酶37℃消化4小时（h）即可从组织标本中分离出人髓核间充质干细胞。人髓核间充质干细胞原代培养3天可见细胞贴壁，30天左右达到80％融合，传至第3代后，细胞形态转变成均一的长梭形或纺锤形，呈漩涡状排列。流式细胞仪检测人髓核间充质干细胞高表达CD29和CD105，不表达或低表达CD34、CD45及HLA-DR。多向诱导21天（d）后，成骨诱导组Alizareen染色和成软骨诱导组

6、Safranin’O染色呈阳性，成脂诱导组油红O染色阴性。结论结论：结论：：：采用0.05%II型胶原酶消化结合贴壁法可从人退变髓核组织中提取具有多向分化潜能的间充质干细胞。【关键词】椎间盘；髓核干细胞；体外培养；诱导分化第二部分低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的生物学诱导效应【摘要】目的目的：目的：：：探索低氧对人退变髓核组织来源的间充质干细胞（NP-MSCs）向类髓核细胞定向分化的生物学效应。方法方法：方法：：：在5%氧浓度下，用含转化生长因子-β3（TGF-β3）诱导培养基培养人髓核间充质干细胞，同时设立在21

7、%氧浓度下诱导培养为对照组。诱导培养第7天（d）和14d，实时荧光定量PCR（Realtime-PCR）检I中文摘要低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的诱导实验研究测低氧诱导因子-1α（HIF-1α)、SOX-9、Aggrecan和II型胶原基因的表达，诱导培养14d，采用免疫荧光法检测低氧诱导组与常氧诱导组细胞II型胶原的表达。组间比较采用独立样本t检验。结果结果：结果：：：NP-MSCs诱导培养第7d时低氧组HIF-1α与SOX-9基因的相对表达量高于常氧组，差异具有统计学意义(P<0.05)，但Aggrecan和

8、II型胶原基因相对表达量无显著性差异(P>0.05)。在诱导培养14d时，低氧组HIF-1α、SOX-9、Aggrecan和II型胶原基因相对表达量均高于常氧组，差异具有统计学意义(P<0.05)，免疫荧光法检测两组细胞均合成II型胶