白藜芦醇体外抑制肠道病毒71型的作用机制研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文mm论文题目白藜芦醇体外抑制肠道病毒71型的作用机制研空研究生姓名张莉指导教师姓名史伟峰专业名称临床检验诊断学研究方向微生物与免疫学论文提交日期2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：臟交鮮位论文是本人在导_爵下，独立进行研究工作臓働顏。除文祀雛_用__，本论文不含其他个人雜体己_綱_励職腿，也不含为获得苏州大学或其它猶机猶学齡E书碰脈關料。财文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声_法律账论文作者签名:綱——日期;苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、

2、保存和使用学位论文的规定，即；学位论文著作权归属苏州大学0本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研宄所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索0涉密论文□本学位论文属在___年_月解密后适用本规定0非涉密论文E3论文作者签名导师签名白藜芦醇体外抑制肠道病毒71型的作用机制研究中文摘要白藜芦醇体外抑制肠道病毒71型的

3、作用机制研究中文摘要目的：体外筛选抑制肠道病毒71型（EV71）的有效中药单体，探讨白藜芦醇抗EV71的效应与分子作用机制。方法：（1）噻唑蓝（MTT）比色法检测几种常见解热抗炎中药单体和对照药物利巴韦林对横纹肌肉瘤（RD）细胞的毒性，以及对EV71的病毒抑制率；（2）EV71感染RD细胞后，Reed-Muench法检测不同时间点EV71组、DMSO组、EV71+白藜芦醇组和EV71+利巴韦林组的RD细胞培养上清液的病毒滴度（TCID50）；（3）Westernblot方法检测不同时间点EV71感染组和EV71+白藜芦醇处理组的IKKα、IKKβ、IKKγ、IκBα、

4、NF-κBp50和NF-κBp65总蛋白及其磷酸化水平，以及EV71衣壳蛋白VP1的表达水平；（4）Luminex液相芯片技术检测EV71感染组与白藜芦醇干预组中RD细胞分泌TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-α、IFN-β细胞因子水平。结果：（1）连翘苷、人参皂苷rh1、黄芩素、虎杖苷、白藜芦醇和利巴韦林对RD细胞的半数毒性浓度（CC50）分别为849.57μg/ml、2766.54μg/ml、140.13μg/ml、532.60μg/ml、82.0μg/ml和3577.03μg/ml；（2）利巴韦林（125μg/ml）体外对EV71的抑制率达78.27%；连翘

5、苷和人参皂苷rh1都未表现出明显的抑制EV71的作用；虎杖苷与黄芩素对EV71的抑制作用较弱，接近无毒浓度的虎杖苷（200μg/ml）和黄芩素（31.25μg/ml）对EV71的抑制率分别为18.69±1.30%和31.91±1.27%；而白藜芦醇具有较好的抗EV71效应，31.25μg/ml时抑制率高达73.28±6.33%，半数抑制浓度（IC50）为20.70μg/ml（病毒吸附后加药），治疗指数（TI）为3.96；（3）与EV71感染组比较，8h、12h、24h时白藜芦醇可明显抑制RD细胞中EV71/VP1合成（P＜0.05）；白藜芦醇处理后可使RD细胞培养上清

6、液中EV71滴度下降（P＜0.05）；（4）EV71感染可激活RD细胞中NF-κB信号通路，IKKα、IKKβ、IKKγ、IκBα、NF-κBp50和NF-κBp65磷酸化水平随感染时间延长逐渐增加，而白藜芦醇可显著抑制IKKα、IKKβ、IKKγ、IκBα、NF-κBp50和NF-κBp65磷酸化水平（P＜0.05）；（5）白藜芦醇I中文摘要白藜芦醇体外抑制肠道病毒71型的作用机制研究可显著降低EV71感染后RD细胞分泌IL-6、TNF-α和IFN-β（P＜0.05），而对IL-2和IFN-α无作用（P＞0.05）。结论：白藜芦醇通过阻断RD细胞的NF-κB信号通路

7、和炎性细胞因子的分泌从而抑制EV71复制。因而，白藜芦醇对EV71感染具有较强的抗病毒作用。关键词：肠道病毒71型；白藜芦醇；衣壳蛋白VP1；NF-κB；细胞因子作者：张莉指导老师：史伟峰II白藜芦醇体外抑制肠道病毒71型的作用机制研究英文摘要Theantiviraleffectandmechanismofresveratrolagainstenterovirus71invitroAbstractObjective:ToscreentheeffectiveChineseherbalmonomersthatinhibitenterovirus71(EV