马疱疹病毒i型gd基因真核重组质粒与原核表达蛋白联合免疫效果研究

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3、行的研究工作及取得的研巧成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其它人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大一学或其它教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。究生签名；时间；年ｒ月心日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：新疆农业大学有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文档，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论

4、文，允许论文入被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编有关数据库进行检索，可（＾公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名；时间：ＰｃｒＴ年厂月如＜日跨４导师签名：时间：如年月ｆｙ＾心枯马疱疹病毒I型gD基因真核重组质粒与原核表达蛋白联合免疫效果研究摘要马鼻肺炎（Equinerhinopneumonitis）被世界动物卫生组织（OIE）列为B类动物疫病，是由马疱疹病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。马疱疹病毒包括马疱疹病毒I型（E

5、quineherpesvirusI）和马疱疹病毒IV型（EquineherpesvirusIV）。EHV-IV主要感染上呼吸道。EHV-I可影响多个器官系统，患畜表现为发热、食欲不振以及呼吸道等症状，有些可引起流产、新生马驹死亡、神经系统疾病等。虽然感染马鼻肺炎后死亡率不高，但是其引起的后遗症会给马匹带来巨大的健康隐患。根据Genbank上公布的马疱疹病毒I型（EHV-I）gD基因的序列分别设计一对特异性引物并进行扩增，获取的目的基因片段克隆到pMD19-T载体中，将测序鉴定正确的目的基因克隆到真核表达载体pVAX1上，PCR、酶切

6、及DNA测序结果证实成功构建了含有马疱疹病毒I型gD基因的真核表达载体pVAX1-gD。通过介导重组质粒转染BHK-21细胞，经Westernblot证实基因可在BHK-21细胞中表达。随后将gD重组质粒与gD蛋白分别与混合肌肉注射免疫小鼠，检测一免、二免的小鼠血清中和抗体效价，以及二免后的小鼠淋巴细胞增殖情况。ELISA与MTT检测结果表明，联合免疫能有效的诱导特异性血清中和抗体的产生，同时显著促进了特异性淋巴细胞的增殖。本研究成功构建了pVAX1-gD真核重组质粒，并且与pET-30a-gD蛋白联合免疫能诱导机体产生较高的体液免

7、疫与细胞免疫，为马鼻肺炎基因工程疫苗的研制奠定了基础。关键词：真核表达；真核重组质粒；联合免疫IStudyontheimmunityofUnitedImmunizationofRecombinantPlasmidandProkaryoticProteinofEquineHerpesVirusIgDAbstractEquinerhinopneumonitiswasassignedasananimalepidemicofClassBbyOIE,Equinerhinopneumonitisisanacute,feverishandcont

8、agiousinfectiousdisease,causedbyequineHerpesvirusTypeI（EHV-I）andequineHerpesvirusTypeIV（EHV-IV）ofalpha-herpesviruswhi