外源谷胱甘肽对牛体外受精胚胎发育的影响

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1、级：论文编号:中囯农业科学院学位论文外源谷胱甘肽对牛体外受精胚胎发育的影响ExogenousGlutathioneSupplementationinCultureMediumImprovestheBovineEmbryoDevelopmentafterInvitroFertilization硕士研宄生：孙尉峻指导教师：杜卫华副研究员申请学位类别：农学硕士专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：胚胎工程培养单位：北京畜牧兽医研究所研宄生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标

2、注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生签名:时间：(年:5：月^日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研宄生签名:时间：年M曰中

3、国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目外源谷胱甘肽对牛体外受精胚胎发育的影响动物遗传育论文作者孙尉峻专业研宄方向胚胎工程种与繁殖指导教师杜卫华培养单位（研究所）北京畜牧兽医研究所硕（博）姓名职称单位专业签名导师评硕导口中国农业科学院北京动物遗传育苗向阳教授博导口畜牧兽医研究所种与繁殖阅硕导口动物遗传育连正兴教授中国农业大学人博导口种与繁殖答辩主席七恩硕导口动物遗传育5fe-中国农业大学博导口种与繁殖硕导口动物遗传育刘国世教授中国农业大学博导口种与繁殖硕导口中国农业科学院北京动物遗传育曹文广研究员博导口畜牧兽医研宄所种与繁殖答硕导口中国

4、农业科学院北京动物遗传育辩朱化彬研究员博导口畜牧兽医研究所种与繁殖委硕导口中国农业科学院北京动物遗传育员王栋研宄员博导口畜牧兽医研宄所种与繁殖磁—硕导口博导口硕导口博导口会议记录（秘书）Ml论文答辩时间地点2015年5月26日畜牧所科研楼二楼西侧会议室Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationExogenousGlutathioneSupplementationinCultureMediumImprovestheBovineEmbryoDevelopmentafterInvit

5、roFertilizationM.S.Candidate：SunWeiJunSupervisor：DuWeiHuaMajor：AnimalBreedingandReproductionSpecialty:EmbryoEngeneeringMay2015摘要氧化还原平衡对于胚胎发育来说是及其重要的，外源添加抗氧化剂对于胚胎维持氧化还原水平起到积极作用。研究表明，谷胱甘肽（GSH）是一种极其重要的抗氧化剂，能消除部分有害的氧化自由基（ROS），维持细胞内氧化还原平衡。本文旨在探究外源GSH对牛体外受精胚胎发育的影响和作用机制。为从胚胎的体外发育能力和囊胚质

6、量方面研究GSH对牛体外受精胚胎的影响，在胚胎培养液中按浓度梯度添加GSH，统计胚胎发育的卵裂率、4细胞率、8-16细胞率、桑椹胚率和囊胚率，以筛选其最适浓度；同时，通过对几种囊胚染色方法的效果比较，建立一种囊胚的三重染色方法；并采用该方法测定了囊胚总细胞数、内细胞团比例和凋亡细胞比例，探索GSH对胚胎抗氧化过程中的作用效果。结果表明，两种一抗或两种二抗同时孵育，能在保证染色质量的前提下大大缩短染色时间，提高染色效率；而且，可在同一枚囊胚中区分滋养层细胞、内细胞团和凋亡细胞，提高囊胚质量分析的准确性。另外，在培养液中添加3mMGSH时，牛体外受精囊胚的

7、发育率最高（51%），显著高于对照组（30%，P<0.05）；囊胚总细胞数显著高于其他组（p<0.05），囊胚质量最佳。可见，胚胎培养液中添加GSH能促进胚胎的体外发育，其最适添加浓度为3mM。其次，在最适添加浓度下对胚胎内源GSH和ROS的含量进行检测，并采用实时荧光定量PCR方法对胚胎发育（Oct4,Sox2,和Klf4）、GSH合成相关基因（Gclm,Gclc,和Gss）和GSH代谢相关基因（Gstp,Gstm,和Gpx）的表达水平进行了测定，以期揭示GSH能提高胚胎发育能力的作用机制。结果显示，GSH处理能够显著提高2-4细胞期胚胎内源GSH含

8、量，降低2-4细胞期胚胎ROS含量（p<0.05），而对其他发育阶段的胚胎则差异不显著。另外，