脂质体制备试验

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1、实验十脂质体的制备及包封率的测定一、实验目的1.掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。2.掌握用阳离子交换树脂法测定脂质体包封率的方法。3.熟悉脂质体形成原理，作用特点。4.了解“主动载药”与“被动载药”的概念。二、实验指导脂质体是山磷脂与（或不）与附加剂为骨架膜材制成的具有双分子层结构的封闭囊状体。常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水姪链和一个亲水基团，将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团血向两侧的水相，疏水的坯链彼此相対缔和为双分子层，构成脂质体。用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂、卵磷脂

2、等；合成磷脂，如二棕柵酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。常用的附加剂为胆-固醉。胆固醉也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制得稳定的脂质体，•其作用是调节双分子层的流动性，减低脂质体膜的通透性。其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂能改变脂质体表血的电荷性质，从而改变脂质体的包封率、体内外其他参数。脂质体可分为三类：小单室（层）脂质体，粒径为20〜50mn,经超声波处理的脂质体，绝大部分为小单室脂质体；多室（层）脂质体，粒径约为400〜3500mn,显微镜下可观察到尤如洋葱断血或人手指纹的多层结构；大单索脂质体，

3、粒径约为200〜lOOOnm,用乙瞇注入法制备的脂质体多为这一类。脂质体的制法有多种，根据药物的性质或需要进行选择。（1）薄膜分散法：这是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。此法优点是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。（2）注入法：有乙醍注入法和乙醇注入法等。“乙瞇注入法”是将磷脂等膜材料溶于乙醯屮，在搅拌下慢慢滴于55〜65°C含药或不含药的水性介质中，蒸去乙瞇，继续搅拌1〜2h,即可形成脂质体。（3）逆相蒸发法：系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，如氯仿中，再按一定比例与含药

4、的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂质体制备，可提高包封率。（4）冷冻干燥法：适于在水中不稳定药物脂质体的制备。（5）熔融法：采用此法制备的多相脂质体，其物理稳定性好，可加热灭菌。在制备含药脂质体时，根据药物装载的机理不同，可分为“主动载药”与“被动载药”两大类。所谓“主动载药”，即通过内外水相的不同离子或化合物梯度进行载药，主要有K+-Na+梯度和H*梯度（即pH梯度）等。传统上，人们采用最多的方法是“被动载药”法。所谓“被动载药”，即首先将药

5、物溶于水相或有机和（脂溶性药物）中，然后按所选择的脂质体制备方法制备含药脂质体，其共同特点是：在装载过程中脂质体的内外水相或双分子层膜上的药物浓度基本-•致，决定其包封率的因素为药物与磷脂膜的作用力、膜材的组成、脂质体的内水相体积、脂质体数日及药脂比（药物与磷脂膜材比）等。对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物，“被动载药”法较为适用。而对于两亲性药物，其油水分配系数受介质的pH值和离子强度的影响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包封率有较大的变化。评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布和包封率等。其中脂质体的包封率是

6、衡量脂质体内在质量的一个重要指标。常见的包封率测定方法有分子筛法、超速离心法、超滤法等。本文采用阳离子交换树脂法测定包封率。“阳离子交换树脂法”是利用离子交换作用，将荷正电的未包进脂质体中的药物（即游离药物），如本实验中的游离的小漿碱，被阳离子交换树脂吸附除去。而包封于脂质体中的药物（如小漿碱），山于脂质体荷负电荷，不能被阳离子交换树脂吸附，从而达到分离目的，用以测定包封率。三、实验内容和操作（-）空白脂质体的制备1.处方注射用豆磷脂o.9g胆固醇0.3g无水乙醉l~2ml磷酸盐缓冲液适最制成30ml脂质体2.操作（

7、1）磷酸盐缓冲液（PBS）的配制:称取磷酸氢二钠（Na^PO.,・12H20）0.37g与磷酸二氢钠（NaH2PO.-2H20）2.0g,加蒸憾水适量，溶解并稀释至1000ml（pPH约为5.7）。（2）称取处方量磷脂、胆固醇于50ml小烧杯中，加无水乙醇1〜2ml,置于65〜70°C水浴中，搅拌使溶解，旋转该小烧杯使磷脂的乙醇液在杯壁上成膜，用吸耳球轻吹风，将乙醇挥去。（3）另取磷酸盐缓冲液30ml于小烧杯中，同置于65〜70°C水浴中，保温，待用。（4）取预热的磷酸盐缓冲液30ml,加至含有磷脂和皿固醉脂质膜的小

8、烧杯屮，65〜70°C水浴中搅拌水化lOmino随后将小烧杯置于磁力搅拌器上，室温，搅拌30〜60min,如果溶液体积减少,可补加水至30ml,混匀，即得。（5）収样，在油镜下观察脂质体的形态，画岀所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体的粒径；随后将所得脂质体溶液通过0.8凹微孔滤膜两遍，进行整粒，再于油镜下观察脂质体的形态，画出所见脂质体结构