资源描述：
《硫酸铜对泥鳅精子活力的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、硫酸铜对泥鳅精子活力的影响动物医学进展,201I,32(4):41—44ProgressinVeterinaryMedicine硫酸铜对泥鳅精子活力的影响陈玉明,陈杰,王日文,陈凤梅,胡家会(聊城大学生命科学学院.山东聊城252059)摘要:以泥鳅精子为受试材料,应用计算机辅助精子分析系统,研究硫酸铜(0.1,l,10rag/L)对泥鳅的精子活力的影响.结果表明,在0h试验组,O.1mg/L的硫酸铜明显降低泥鳅精子运动速度,lmg/L的硫酸铜对运动时间和速度产生显着抑制作用,10mg/L的硫酸铜对运动百分数,运动时间和速度都产
2、生明显影响(P<O.05);泥鳅精子在硫酸铜中暴露2h后,各运动参数均明显下降;硫酸铜对泥鳅精子运动能力的影响具有浓度和时间依赖性.表明硫酸铜对泥鳅精子运动具有抑制作用,对泥鳅具有潜在的生殖毒性.关键词:硫酸铜;精子活力;泥鳅中图分类号:$859.82文献标识码:A文章编号:1007—5038(2011)04—0041—04硫酸铜能治疗由纤毛虫,小瓜虫,车轮虫和鞭毛虫等引起的各种鱼类疾病,是一种水产常用药物.同时,铜(Cu)也是生物体内一种必需微量元素,对造血,细胞增殖,酶活性及某些内分泌功能都有重要影响L1].然而,即
3、使是生命过程必需元素,剂量使用不当会对包括鱼类在内的各种水生生物产生毒害作用.研究发现,高浓度的Cu对鱼类行为反应,生理指标,组织结构及生殖发育等产生较大影响,可表现出较强毒性[2].农业生产中广泛使用的含铜杀菌剂,杀虫剂和肥料等,随地表径流进入水体后会加剧铜的污染[5].目前,包括硫酸铜在内的重金属污染对生物生存及生物多样性产生严重影响[6],对污染敏感物种危害更大.目前,人们更多关注硫酸铜对鱼类个体致死浓度和安全浓度方面研究,在细胞亚致死浓度水平上研究较少,未见对泥鳅(Misgurnus彻g"cn￡"s)精子细胞毒性的研究
4、.本试验应用计算机辅助精子分析(computer-assistedsemenanalyzer,CASA)技术研究不同硫酸铜浓度暴露对泥鳅精子运动参数的影响,探讨硫酸铜对淡水硬骨鱼生殖毒性作用,为渔业养殖提供依据.1材料与方法1.1材料1.1.1试验用动物试验用泥鳅购于聊城市交运大市场,到达实验室后,先在10mg/L的KMnO溶液中浸泡10rain杀菌消毒,玻璃缸(60cm×25cm×35cm)内饲养2周后用于试验.试验用水为曝气3d以上的自来水,连续充气,每天换约1/5体积的水.1.1.2主要试剂试验用硫酸铜,氯化钾和氯化钠等
5、化学试剂均为分析纯,为南京南奥科技有限公司产品.参照MdrridnT等L8]的方法并加以改进,用双蒸水配制精子保存液和激活液.精子保存液含0.15mol/LNaC1,0.01mol/LKCl,0.001mol/LCaC12和0.01mol/LTris—HC1(pH6.5),渗透压为330mOsm/kg.精子激活液含0.06mol/LNaC1,0.0lmol/LKC1,0.001mol/LCaC12,0.01mol/LTris-HCl(pH6.5),渗透压为150mOsm/Kg.硫酸铜溶液分别用保存液和激活液配制,硫酸铜终浓度分
6、别是0.1,1,10mg/L.各种溶液均保存在4℃冰箱内,24h内完成试验.1.2方法1.2.1精子的收集取健康性成熟泥鳅,在清水中冲洗,再用吸水纸吸去鱼体表面的水.称重和测体长后,解剖取精巢.按1:1O(w:V)将精巢放在保存液中,用眼科剪剪碎,让精液溢出,然后离心1rain(200r/min),弃去组织碎块加入少量保存液,计数,制成精子悬液(密度约为l×1O/mL),1.2.2不同浓度硫酸铜处理泥鳅精子将精子悬液分为2组(Oh组和2h组),暴露在含有不同浓度的硫酸铜溶液中.一组在暴露后立即测试运动参数(Oh组),另一组在4
7、℃冰箱内暴露2h后测定运动收稿日期:2010-10—12基金项目:山东省自然科学基金项目(ZR2010CM048)作者简介:陈玉明(198O一),男,山东菏泽人,硕士研究生,主要从事生殖毒理学研究.*通讯作者42动物医学进展2011年第32卷第4期(总第214期)参数(2h组).对照组不含硫酸铜.1.2.3精子运动参数检测分别取5L精子悬液,置于干净载玻片上,迅速用45L含相同浓度的硫酸铜激活液混合,混合10S后(精子已被充分激活)在光学显微镜下观察和记录精子运动参数.精子运动时间:从激活开始,到精子运动百分数减少到2O时所用
8、的时问;精子运动百分数:同一视野中,运动精子数与全体精子总数的百分比;精子运动速度:精子位移与时间比,激活60S后由CASA测定;相对平均速度:一定浓度硫酸铜处理后的精子运动速度与对照组精子速度的比值.精子激活后每隔1min记录1次运动百分数,并拍摄.每组试验至少重复3次,每
