番茄红素对巨噬细胞炎症反应的调控及其分子机制探讨

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1、中山大学博士学位论文番茄红素对巨噬细胞炎症反应的调控及其分子机制探讨姓名：冯丹申请学位级别：博士专业：营养与食品卫生学指导教师：凌文华20100530◇中山大学博士学位论文番茄红素对巨噬细胞炎症反应的调控及其分子机制探讨制细胞对炎症因子和应激反应等方面也起着关键作用。NF，r,B是一个重要的转录因子，介入了免疫和炎症反应中多种基因表达的调节。MAPKs和NF一心均可被多种炎症刺激因子所激活，引起炎症信号通路的传递和炎症反应。Toll样受体(Toll．1ikereceptor,TL鼬是目前研究发现并广受关注的一种模式识别

2、受体，在宿主对微生物的防御机制和炎症反应调节中起重要作用。其中Toll样受体4(TLR4)主要识别G‘细菌内毒素脂多糖LPS和一些内源性刺激物，介导炎症信号的胞浆内传导。近年来不少研究显示TLR4受体介导的炎症信号通路参与了一些慢性炎性疾病如癌症和心血管疾病的发病过程，选择性的抑制TLR4通路的传导可能会成为治疗慢性炎性相关疾病的一个新的作用靶点。另外，在TLR4介导的炎症信号通路传递中，细胞在受到刺激后，TLR4受体必需首先易位到脂筏处与髓样分化蛋白．2(myeloiddifferentiation．2，MD．2)构

3、成复合体，才能介导LPS或其它刺激因素诱导的下游炎症信号通路的传导和炎症因子及介质的生成。脂筏是细胞膜脂质双层内中富含鞘脂、胆固醇及特殊蛋白质的质膜微区，作为蛋白质的相互作用募集平台，脂筏在跨膜信号转导、跨细胞运输、细胞胞饮等过程中发挥着重要的作用，并在一些感染性疾病发生中也扮演着重要的角色，如干扰脂筏的完整性可能会影响一些致炎因子的生成。因而，对TLR4受体这一炎症信号传导通路中的最上游关键分子脂筏易位的调控将对降低机体炎症反应和防治炎症相关性疾病均具有重要意义。流行病学研究提示植物性食品具有广泛的促进健康和防治肿瘤

4、、心血管疾病、糖尿病、肥胖等疾病的作用。其中，植物性食物中存在的大量植物化学物质(phytochemicals)，它们也具有广泛的生物活性作用和健康促进作用，并逐渐受到人们的关注。番茄红素是一种脂溶性的类胡萝卜素，分子式为C40H56。作为一种天然色素番茄红素广泛存在于番茄、西瓜等蔬菜和瓜果中。流行病学研究资料显示血浆中番茄红素的水平与一些慢性疾病如心血管疾病和癌症的发生率呈负相关。虽然番茄红素对一些疾病的防治作用在一定程度上归功于其强大的抗氧化作用，但近年来的研究证据显示番茄红素也可通过其它的一些作用途径发挥机体保护

5、效应。如最近研究发现番茄红素除了具有抗氧化抗癌作用外，还能够降低血浆胆固醇水平，具有抗增殖和保护血管内皮等功能。炎症反应与一些慢性疾IV◇中山大学博士学位论文番茄红素对巨噬细胞炎症反应的调控及其分子机制探讨病如动脉粥样硬化，癌症发生发展密切相关。番茄红素对炎症反应的调节作用及其具体的作用靶点和分子作用机制目前尚不十分清楚，值得深入探讨。RAW264．7细胞是一种鼠源性的巨噬细胞，可被外界刺激物如LPS激活释放大量的炎症因子和炎症介质而模仿体内的炎症反应。因而，为了进一步研究番茄红素的生物学作用和作用靶点，本研究通过体外

6、建立LPS诱导的巨噬细胞炎症反应模型，探讨番茄红素抗炎效应及分子作用机制，并进一步明确它对一些慢性疾病防治的作用机理。研究方法1、番茄红素对RAW264．7巨噬细胞中炎症反应的调控(1)番茄红素对RAW264．7巨噬细胞毒性及活力的影响lrtM，5ttM，10IxM番茄红素孵育RAW264．7巨噬细胞24h，分别采用2，4一二硝基苯肼比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(1actatedehydrogenase，LDH)含量，噻唑兰(thiazoylbluetetrazoliumbromide，M，丌)法测定细胞增殖来评价番茄

7、红素对RAW264．7巨噬细胞毒性及活力的影响。(2)番茄红素对LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO和IL．6生成的影响将RAW264．7巨噬细胞接种于24孔培养板，分别与1州，5rtM，10州番茄红素预孵育lh，再加入1扯g／mLLPS孵育24h收集细胞培养液，分别采用亚硝酸盐法和ELISA法检测巨噬细胞NO和IL．6生成的水平。(3)番茄红素对LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞诱导型～氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)和IL．6表达的影响将RAW264．7巨噬细胞

8、接种于6孔培养板，分别与llaM，5洲，10rtM番茄红素预孵育lh，再与1lxg／mLLPS孵育6h收集细胞总RNA用于检测iNOS和IL．6的mRNA表达量；或与11．tg／mLLPS孵育24h后收集细胞总蛋白，采用Westernblot方法检测iNOS蛋白表达量。2、番茄红素对巨噬细胞炎症反应调控的分子机制的探讨(1)番茄红