射干的RAPD研究及种质资源描述规范与保存规范的制定

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1、湖北中医学院硕士学位论文射干的RAPD研究及种质资源描述规范与保存规范的制定姓名：侯俊杰申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：陈家春;刘合刚20070526中文摘要射干为鸢尾科植物射干Belamcandachinensis(L．)DC．的干燥根茎．为常用中药，始载于《神农本草经》，也是湖北的道地药材之一．具有解毒利咽，清肺去痰，散血消肿之功效．对流感、咳嗽，哮喘，扁桃体炎、咽喉炎，急性喉头水肿、肺炎、泌尿系统感染、胃肠炎等病症有较好的疗效，临床应用广泛．本文对射干近年来在各方面的研究进展作了综述，对射干古今本草中的记载和应用作了梳

2、理．主要从以下两个方面对射干种质资源进行了研究：①采用RAPD分子标记技术对射干不同种质的遗传多样性和亲缘关系进行了研究；②制定了射干种质资源保存规范．研究结果如下：1．实验对反应体系中5个重要因子进行了正交试验，筛选出最优的反应体系，并在此最优体系的基础上，分别对退火温度、退火时间、扩增循环数进行了单因素试验，得到了RAPD反应合理的热力学参数，确定了一套优化的射干RAPD反应体系和PCR扩增条件．2．从100条随机引物中筛选出了14条具有多态性且重复性好的引物对湖北省16个不同产区的射干试样进行RAPD标记研究，共扩增出126个

3、条带，其中多态性条带96个，占总扩增条带数的76．2％，每个引物可扩增出4—9个条带，平均为6．9个，证明不同产地的射干有丰富的遗传多样性．3．样品问相似系数矩阵测度值为0．073—1．000，其数值越大表示遗传距离越近．聚类分析结果中，供试品种被聚为5类，从树状图中可以直观地看出绝大多数地理分布距离越近的样品，在聚类树状图上的距离较近，说明它们之间的遗传背景差异越小，反之越大．但生态条件特别是小生态环境对射干遗传差异的影响亦不可忽视．射干RAPD多态性的聚类分析结果与湖北省射干主要产区的地理分布比较吻合，同一地理分布范围内，产地生

4、态环境条件不同，射干的遗传背景也存在不同程度的差异．4．通过查阅文献，收集资料，调查、整理本项目研究结果，制定了射干种质资源描述规范及保存规范，规定了射干种质资源产地保存的栽培环境、适宜条件，栽培技术及方法．关键词：射干；RAPD；遗传多样性；种质资源；描述规范；保存规范ABSTRACTRhizomeBelamcandaeisthedriedrhizomeofamedicalplantBe肠mcandachinensis(L．)DC．fromBelamcandagenus，iridaceae．Itisacommonlytraditi

5、onalChineseherbalmedicine，andagenuinedruginhubei．Itusedtotreatflu，cough，inflammation，asthma，pneumoniaaswellasthroattroublessuchastonsillitis，pharyngolaryngitis，laryngealedemaandSOon．ReportsanddocumentsstudiedonvariousresearchingfieldinpastfewyearsaboutBelamcandachinens

6、is(L．)DC．Weresummarized．WestudiedonidioplasmresourcesofBelamcandachinensis(L．)DC．i11followingaspects：①StudiedonthegeneticdiversityofBelamcandachinensis(L．)DC．whichfromdifferemregionsbyusingthemethodofRAPD．(室)CoustitutethePreservedstandardforBlackberrylilyRhizomeofBelam

7、candachinensis(L．)DC．Andtheresultsobtainedasfollows：1．Intheexperiment，fiveessentialfactorswhichmayaffecttheresultofRAPDwereoptimizedbyorthogonalexperimentandthreesinglefactorexperimentsofannealingtemperature，annealingtimesandcycletimes．Theresultshowedthattheoptimalcond

8、itionsofRAPD—PCRsystem．2．Therewere100randomprimers(10一mers)usedforthePCRamplificationofgenomicDNAfragment．Fourteenoft