烟草花叶病毒地黄分离物移动蛋白基因的克隆、序列分析及对番茄的遗传转化

《烟草花叶病毒地黄分离物移动蛋白基因的克隆、序列分析及对番茄的遗传转化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河南农业大学硕士学位论文烟草花叶病毒地黄分离物移动蛋白基因的克隆、序列分析及对番茄的遗传转化姓名：杨学习申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：蒋士君;张振臣20030601中文摘要根据已发表的TMVMP基因的核替酸序歹q设计引物，以感染TMV的地黄(RehmanniaglutJnosalibosch)叶片总RNA为模板，经RT—PCR扩增获得TMV地黄分离物MP基透的蘑的片段。将冀尧隆裂pMD一18一Tvector上，得到含有完整MP基因的重组质粒pTMP—D。序列分析表明：移动蛋白基因全长804bp，编码268个

2、氨基酸。与TMV—Ul株系的核苷酸序列和由此推导的氨基酸穿列同源性分别淹78％秘80％。因二者核替酸痔裂嗣滚性较羝，摧测该分离物可能为烟草花叶病毒的～个新株系，有关该分离物的生物学特性和全基因组序列正在进一步研究。謦

3、l用PCR方法对获褥憋TMV地黄分离物醚p基毽避毒亍缺失改造，在辩p基因57端缺失掉2lbp的核苷酸。分别将全长的和57端缺失的MP基因克隆到原核表达载体pET一30a上，构建了全长和缺失型MP基因的原核表达载体pEMP—F和p魏p—D。以番茄常规品种中蔬6号为试材，对番茄的再生转化系统进行了研究。以番茄子

4、时为外植体，适宜的分化培养基为Ms+6一BA1．0mg／L+IAA0．2mg／L。在番菸的遗传转他中，卡那霉素(kanamycin)的筛选压秘头趣菌素(cephal。gporin)的抑菌浓度分别以i0mg／L和400mg／L为宜。将全长和57端缺失的MP基因通过中闻载体pROK219克隆到双元植物表达载体pBINl9上，将建了全长及缺失型MP蒸因的植物表达载体pBMP—F秘pBMP—D。上述植物表达载体在土壤农杆菌LBA4404介导下，转化番茄生产品种“中蔬6号”，舀前已获得愈伤组织，透一步斡工作正在进行之中。关键词烟草

5、花叶病毒移动蛋自基因序列分析遗传转化CloningandSequeneingofTMVRehmanniaisolateMovementProteinGeneand誓}ansformationtotomato、Supervisors：AssociateProfessorJiangShiinnResearchProfessorZhangZhenchenMasterCandidate：YangXuexiABSTRACT：AccordingtOpublishednucleotidesequenceoftobaccomosaicv

6、irus(TMV)。movementprotein《MP)geneofTMVisolatedfromDihuang(Rehmanniaglutinosa)wassynthesizedbyreversetranscripationpolymerasechainreaction(RT-PCR)andclonedintopMD—t8，TvectortoobtaintherecombinantpiasmidpTMP—D．TheresultsofsequenceanalysisshownthattheORFofMPgeneis80

7、4bp、encode268aminoacids．ComparingwithstrainTMV·UI，whichshares78％identityintermsofnucleotideand80％ofdeducedaminoacidsrespectively．Becausethelowerhomologous．itissupposedthattheRehmanniaisolatemaybea13ewstrainofTMV．下鼯mudyofbiologicalcharacteristicsandgenomeofthisiso

8、lateisinprocess．Adeletionmutant(5-terminal21bpdeleted)wasobtainedbyPCR．Thefull—lengthMPgeneandthedeletionmutantwereconstructedintoexpressionvectorpET30a(+)+Thetwoexpressionvectors(pEMP-FandpEMP—D)containingfifll—lengthMPgenemadits5-regionaldeletionmutantwereacqui

9、redrespectively．WithtomatovarietyZhongShu6astestedmaterial，thepreliminal’YstudiesoncotyledondifferentiationmediumandthenammttoleranceofKanmnycinandCephalospori