衣霉素在血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及分子机制研究

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1、学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究所做的贡献均己在论文中作了声明并表示了谢意。学位论文作者签名：／j笋夥日期：如易．s歹_7学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可以采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可以向国家有关机关或机构送交论文的电

2、子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅。(保密论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密论文，密级：——保密期限为——年。学位论文作者签名：1尹易日期：为膨一只1指导教师虢庆、)畅B期：酗诧／D主f一’中文摘要学位论文中英文摘要姓名：伊男学号：091201021论文题目：衣霉素在血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及分子机制研究指导教师：刘畅教授所在学院：生命科学学院⋯⋯‘{由外源性刺激诱发的血管平滑肌细胞的增殖和迁移，是诱发动脉粥样硬化和血管j再狭窄的重要原因。近期的研究表明，内质网应激(endoplaSmicreticulumstress，ERS)i与多种外源性刺激导致的血

3、管平滑肌细胞的病理、生理活动密切相关。近年来针对动i脉粥样硬化疾病发展过程中ERs的研究方兴未艾，但研究对象主要集中在损伤的内i皮细胞和巨噬细胞中，而对于血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs){中ERS的作用及机制研究相对较少。本课题关注于ERS在VSMCs中可能产生的作i用及作用机制，为动脉粥样硬化疾病的预防和治疗提供参考。衣霉素(tunicamycin，Tm)作用于VSMCs后可产生明显ERS。现象包括：产i生明显的xBPl的mRNA剪切，并且使ATF6、Bip和cHoP的mIⅢA表达量以及!xBPls、G印94和Bip蛋白的表达量呈剂量

4、依赖性上升。然而通过CCK．8及MTT实}验证明Tm对于VsMcs的细胞活力影响有限。Annexin．V-FITC／PI双染实验结果表明Tm仅诱导产生轻微的细胞凋亡。本研究中我们通过溴脱氧尿苷(BrdU)掺入法和形态学观察的方法首次发现预i孵1、m能够显著地剂量依赖性地抑制由血小板衍生生长因子(platelet．derivedgr0谢hjfactor，PDGF)诱导的VSMCs的增殖。同时我们也首次通过划痕实验和迁移小室；(Transwell)实验发现Tm具有明显抑制PDGF刺激的VSMCs迁移运动的效果，并i且具有剂量依赖性。在分子水平上我们检测了增殖细胞核抗原(PcNA)和基质金

5、属i蛋白酶2(MMP。2)的蛋白表达水平以及MMP．2的活性，证实11m能够降低PDGF}刺激的VSMCs中PCNA和MMP一2蛋白的活性。经实验发现Tm作用于PDGF刺激的VSMCs可以引起细胞中血红素加氧酶1中文摘要一一一●--●----●●●----------●--●----●-●-一一一一一一一’一一__一一__一-●●●●●●●一一__一●一一__一----●---一一_-_一_●_●●●------_一一一一一一--------●●-一；(hemeoxygenaSe．1，Ho．1)的mRNA和蛋白表达量的升高，并降低ERKl／2的磷酸i化水平和活性。Tm的负调控作用与c

6、yclinE．cDK2和cyclinD1．cDK4蛋白活性降低；和p27的活性升高有关。更重要的是，HO．1的siRNA可以部分抵消Tm抑制PDGF—BB；诱导的vsMcs增殖和迁移的作用。上述结果说明1’m对VsMcs增殖和迁移的影响{是通过诱导Ho．1表达、抑制ERKl／2信号通路的活化、阻滞细胞周期进程使之停留j在G1／S期等机制共同作用产生的。另外，Tm可以降低PDGF作用产生的MCP．1、；PAI．1和0PN等部分炎症因子的基因表达水平。j综上所述，本研究证明了预孵ERS的诱导物Tm可以防止由PDGF刺激产生的}VsMcs的异常增殖和迁移运动。在此过程中，Ho．1蛋白及细胞

7、周期相关蛋白共同发i挥调控作用。因此我们认为，适当浓度的Tm对于动脉粥样硬化中VsMcs增殖和向；内膜迁移的运动可能具有良好抑制效果，并对动脉粥样硬化等心脑血管疾病具有潜在；的预防和治疗作用。关键词：衣霉素，内质网应激，血管平滑肌细胞，增殖，迁移，血红素加氧酶1，血小板衍生生长因子IIABSTRACTThefhnctionandmechanismstudyoftunicamycinonVascularsmoothmuscleceUproliferation