小麦抗锈基因的分子标记

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1、西南农业大学硕士学位论文小麦抗锈基因的分子标记姓名：高文娜申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：王中康;陈万权2003.5.1摘要。一。}≮、采用AFLP技术和方法，对携带Lr34的小麦近等基因系、染色体代换系进行了DNA多态性分析。共筛选了78对EcoRI／MseI引物(上海生工)，筛选获得一对特异性引物(E03：5’-GACT(ⅪGTACCAArrCAAT-3’和M01：5'-GATGAGTCCl-GAGTAACAT-3’)，可在抗病亲本中扩增出两条大小分别为240bp和300bp的DNA多态性片段，在感病亲本中未能扩增出同等大小的DNA片段。通过对一条多

2、态性片段(240bp)进行分离克隆和序列测定，表明这一与抗病基因可能有关的DNA多态性片段大小为237bp。根据此序列设计引物，可进一步对抗病亲本进行回检及开展与抗病基因的连锁分析。{根据与持久抗秆锈基因Sr31有关的DNA多态性片段序列，利用Primer5．0软件共设计出7对特异性引物。通过利用Sr31的小麦近等基因系及其它抗／感材料进行回检筛选，获得Sr31的特异性引物(B凡l：5’cacCCCcttg昏ageaca3’和BRl2：5’agccagtatcotccacctoct3’)，可定性扩增DNA特异性区段，其片段大小为331bp，此可用作Sr3l的SCAR

3、．标记。以Kavkaz和Lovrinl3作为供体亲本，以完全感病品种McNair701作为母本，分别构建了123株和120株F2代分离群体，苗期抗性鉴定结果表明，二者对小麦秆锈菌优势小种21C3的抗性系分别由一对显性基因和二对显性互补基因所控制。利用St31基因的SCAR标记对F2代抗感单株进行分子检测，并用QTXbit软件进行连锁遗传分析。结果表明，Sr31的8CAR标记与抗病基因有较紧密的连锁遗传关系。在Kavkaz×McNair701的杂交组合中，SCAR标记与抗秆锈基因Sr31的遗传距离为25．8cM+4．2cM：在Lovrinl3×McNair701的杂交

4、组合中，其遗传距离为19．3cM+3．4cM。在小麦抗锈育种中，利用St31的SCAR标记进行基因鉴定和辅助选择具有较高的可靠性。“本文还就AFLP技术的可靠性、AFLP分析时应注意的问题、RAID标记的基因类型、RAPD对易位系的鉴定以及Sr31分子标记的应用前景等问题进行了讨论。关键词：小麦锈病抗病基因分子标记，o。≥乙}’f渣驴D——一—一一一-_—_}一：～二．一l一DevelopmentofDNAMolecularMarkersforGenesofWheatRustResistanceAbstractThegenesforlearrustresistanc

5、e上r34andforstemrustresistanceSt3Iareallthemostimportantresistancegenesagainstrustfungiinwheatintheworld．ItisimportantforutilizingLr34andSt31rapidlyandeffectivelyinwheatbreedingprogramtodevelopthemolecularmarkerslinkedtoresistantgenesandestablishthetechnicalsystemofmolecularmarkerassist

6、antbreeding．DNApolymorphismofthenearisogeniclinesandchromosomesubstitutionlineswith／withoutLr34wereanalyzedusingAFLPmethod．Atotalof78randomprimerpairswerescreenedtoidentifytheAFLPmarkerslinkedtoLr34gene．TwopolymorphicDNAfragmentswiththemolecularweightof237bpand300bprespectivelyWfflt℃am

7、plifiedbyapairofspecificprimers(E03：5’-GACTGCGTACCAATTCAAT-3’andM01：5’．GATGAGTCCTGAGTAACAT-3’)intheresistantparentsandnotinthesusceptibleparents．The237bppolymorphicDNAfragmentwasseparated,clonedandsequenced．Basedonthesequence，thespecificprimerp豳couldbedesignedandthelinkageanalysisbet