柽柳水提物对小鼠脾细胞及肿瘤细胞增殖反应的影响

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1、柽柳水提物对小鼠脾细胞及肿瘤细胞增殖反应的影响作者：梁文杰，王志超，马国平【摘要】目的探讨中药柽柳水提物(TamarixchinensisLour.extractwithwater，TEW)的生物学活性。方法采用MTT法检测了TEW对小鼠脾细胞及肿瘤细胞增殖的作用。结果无论有无ConA诱导，TEW均可刺激小鼠脾细胞增殖;高浓度的TEW对肿瘤细胞K562及TE13有一定抑制作用，而对于SK-OV3，BGC823及BxPC-3，PANC-1等基本无抑制作用。结论TEW对小鼠脾细胞具有丝裂原样作用，但对肿瘤细胞的抑制作用甚微。

2、【关键词】柽柳;小鼠脾细胞;肿瘤细胞　柽柳又名西河柳，为柽柳科植物柽柳TamarixchinensisLour.的嫩枝叶。药性辛平，归肺、胃、心经。有发表透疹，祛风除湿之功效，应用于麻疹不透，风疹瘙痒及风湿痹痛等[1]，还具有抗菌抗炎、止咳祛痰及抗组胺等作用[2]。但关于柽柳的免疫学及对肿瘤细胞的作用报道甚少，本文就柽柳水提物(TEW)对小鼠脾细胞及肿瘤细胞增殖反应的影响进行报道。　　1材料与仪器6　　1.1动物体质量18～22g的昆明小鼠，购于河北医科大学实验动物中心。　　1.2肿瘤细胞株人红白血病细胞株K562，人胃

3、癌细胞株BGC823，人食管癌细胞株TE13，人卵巢癌细胞株SK-OV3及人胰腺癌细胞株BxPC-3、PANC-1等，由河北医科大学第四医院科研中心提供。　　1.3仪器及试剂美国SHELDON公司TC2323型CO2培养箱;日本OLYMPUSLH50A型倒置相差显微镜;奥地利Anthos公司HT2型酶标仪等。四氮唑盐(MTT)试剂及ConA购自Sigma公司，SDS为Biotec公司产品，RPMI1640为GIBCO公司产品。　　1.4药物提取柽柳购自河北安国，产地辽宁，经河北医科大学药学院鉴定。取柽柳干品5g,加蒸馏水

4、100ml浸泡过夜，100℃水浴1h，滤纸过滤除去不溶物质，用无菌滤器除菌，用旋转蒸发仪测定溶质含量，调节浓度为10mg/ml，作为TEW于4℃冰箱保存备用。　　2方法　　2.1小鼠脾淋巴细胞增殖实验常规制备小鼠脾细胞悬液，调整细胞浓度为5×106/ml，将小鼠脾细胞悬液100μ6l/孔接种于96孔培养板，而后分别加入阴性对照磷酸盐缓冲液(PBS)、阳性对照ConA及不同浓度TEW，各设3个复孔。将培养板置于饱和湿度、37℃，5%CO2培养箱中培养48h，加入5mg/mlMTT10μl，再培养8h，离心弃上清，每孔加入1

5、5%SDS100μl，过夜。次日用酶标仪检测各孔吸光度(OD)值，测定波长λ=570nm，参考波长λ=630nm。并计算增殖指数(PI)。其计算公式为：PI=实验组OD值/对照组OD值×100%。　　2.2体外抑瘤实验将肿瘤细胞株悬液每孔100μl(含1×104个细胞)接种于96孔培养板，分别加入阴性对照PBS、阳性对照200μg/ml的顺铂(DDP)和250μg/ml的羟基喜树碱(HCPT)以及不同浓度TEW各10μl，各设3个复孔。置于饱和湿度、37℃、5%CO2培养箱中培养72h，于培养结束前4h，各孔加5mg/m

6、lMTT10μl，培养结束后，弃上清，每孔加15%SDS100μl，过夜。次日用酶标仪检测各OD值，测定波长λ=570nm，参考波长λ=630nm，并计算抑制率(CI)，CI=(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值×100%。CI﹥30%为敏感。　　2.3统计学处理数据用±s表示。两组间数据用t检验，多组间数据用单因素方差分析。应用TheSASsystem6.12统计软件计算。所有实验结果均重复3次。　　3结果　　3.16柽柳水提物TEW对小鼠脾淋巴细胞的作用在体外培养的小鼠脾淋巴细胞培养液中加入31.3～500μ

7、g/ml浓度的TEW可刺激小鼠脾淋巴细胞增殖，镜下观察可见细胞体积变大，数量增多，并分裂成簇，见图1，而对照组无此变化。加入MTT后，可见蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)远较对照组为多，见图2。说明TEW本身具有丝裂原样作用。并且TEW对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应亦有较明显的促进作用，提示TEW和ConA的作用具有一定的协同性。见图3。A.未处理细胞;B.125μg/ml的TEW处理48h细胞图1小鼠脾细胞形态(200×)A.阴性对照组;B.125μg/ml的TEW处理48h实验组图2甲瓒结晶形态(200×)

8、　　3.2TEW对肿瘤细胞增殖作用的影响表2结果显示，与阴性对照比较，250～500μg/ml高浓度的TEW对血液细胞源性细胞株K562及上皮细胞源性细胞株TE13具有一定的抑制作用，但随着药物浓度的下降，抑制作用迅速下降、消失，抑制率甚至出现负值。而对于人卵巢癌细胞株SK-OV3、人胃癌细胞株BGC823及人胰腺癌