RTPCR酶切法对柯萨奇B组病毒的检测和分型

《RTPCR酶切法对柯萨奇B组病毒的检测和分型》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、X-t在尤多之丈完成之fi7-潜岁七六红丈首多冗向A的-v-筋-砂4lz教授及lw-)Ir孩一实月验寻粉多仑j七毖馨lgaa程中,4子井另带i"的-tr必r岁7Ak以衷洲心的,7}4::Y的*MaAW澳大_tJ.g)JVC*}4}院(CSIRO夕的羊尾z$厚士，许守尾厚f在}}-3v-验州今予的销带月乡%i,表wl育O感澎梦/'M脚在式三丰的学习，工汤色三矛矛。斑抢丈.#m5过程中的教渗^J,V岁7广叱谨治学的科学乃Ji,勇于创新的涝撼反我班丈j连勇多汤色，并谈多浦丸远试澎我在人造的遣A乡上不Arm取，自sif不尾!原创性声明本人声明:所呈交的硕士学位论文，是本人在指导教师的指导

2、下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:育苍日期:?ft3年S月朽尽关于论文使用授权的说明本人同意学校有权保留并向国家有关部门送交学位论文的复印件，允许论文被查阅和借阅。同意学校及国家有关机构有权公布论文的全部或部分内容，并采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。论文作者签“:穿乡二指导教师签名日期:a}}.}日期:'yc}3.亨，万内容提要本实验利用GCG软件系统确定了柯萨奇B组

3、病毒B,-B6型cDNA中特异的限制性内切酶酶切位点，建立了完整的限制性内切酶酶切位点库。我们利用柯萨奇B组病毒不同型别所特有的限制性内切酶酶切位点，对柯萨奇B组病毒的cDNA进行了分析，从而完成了柯萨奇B组病毒6个型别的鉴定和分型。实验结果表明:该检测方法具有快速、便捷、准确、无非特异性反应的优点，其准确率可达100%。本研究结果不仅为病毒性心肌炎的检测提供了新的方法，也为其它病毒性疾病的检测开辟了新的思路并奠定了可靠的理论与实验基础，因此，该项研究在病毒学，分子生物学，检验学等基础医学研究中具有重要的理论与实践意义。RTPCR酶切法对柯萨奇B组病毒的检测和分型前言柯萨奇B组病

4、毒CBV(CoxsackiegroupBvirus)是危害人类健康的主要病原体之一1u，它不仅可以引起流行性胸痛，胸膜炎，心包炎_.s}还可以引起病毒性心肌炎‘’、“、6l，造成扩张型心肌病，一，’n,sil最终导致碎死或心力衰竭。目前在国内，柯萨奇B组病毒引起的病毒性心肌炎患者有日益增多的趋势，尤其以青少年和老年为主，但迄今为止，临床上还缺少一种快速，准确的检测方法。柯萨奇B组病毒的检测，最初依赖于病毒培养，但病毒培养方法耗时长，耗费高，不能满足临床上早期诊断及治疗的要求。直到1966年美国科学家NAKANE发明酶联免疫技术(Enzyme-linkedimmunosobenta

5、ssay)ELISA的应用，柯萨奇B组病毒的快速检测才开始发展起来。ELISA方法是利用抗原一抗体特异的免疫学反应和酶学催化反应，以酶促反应的放大作用来显示初级免疫学反应，它由一次或数次的免疫学和酶学反应组成，当抗原抗体特异结合后，酶的底物在酶催化作用下发生水解，氧化生成有色物。在此反应中，酶的生物学活性和产物的RTPCR醉切法对柯萨奇B组病毒的检测和分型颜色变化呈正比，从而体现了抗原抗体的数量变化。1980年YolkenRH就利用ELISA方法成功地检测到了柯萨奇B组病毒的抗原[ion，此后KatzeMG和McCartneyRA等人分别在1980年和1982年利用ELISA方法

6、也检测到了柯萨奇B组病毒的抗体〔”、,Y)。作为一种单链线状RNA病毒，CBV20面体外壳是由VP=VPa,VP=VP。构成的‘’:，’，其中VP.是唯一可以诱导特异性体液免疫反应的结构〔’」1。由于CBV各型基因组组内同源性为80%,VP,基因各型间同源性又高达70%0'"，而主要针对VP.所产生的特异性抗体工gm又是ELISA方法中重要的检测抗体指标，所以Igm并不能对其柯萨奇B组1-6型病毒进行准确鉴别!’司。虽然ELISA相对来说是一种廉价，快速，重复性好的CBV检测方法!”，，但是，由于ELISA方法样品中含有的杂质蛋白，温育的时间，洗涤次数的长短都会不同程度的产生非特

7、异性反应，从而对实验结果造成影响，产生误差。迄今为止，操作过程还未统一标准化，所以，有必要寻找一种新的更为有效的病毒检测和分型的方法。1975年，E.SOUTHERN创立了印记转移法，即分子分子杂交法，在此基础之上延伸了NORTHERN法，其原翅RT-PCR酶切法对柯萨奇B组病毒的检测和分型是RNA在甲醛凝胶电泳分离后，可以按其原顺序在高盐缓冲液中利用虹吸现象被转移并被固定到一张硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，然后再与被标记的RNA探针做分子杂交，结果膜上与探针杂交后的RNA分子便通过