忽地笑组织培养及次生代谢物加兰他敏含量分析

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1、摘要：忽地笑(LycorisaureaHerb)为单子叶石蒜科(Amaryllidaeeae)石蒜属(Lycoris)植物。其主要次生代谢产物加兰他敏，传统上是治疗重症肌无力、dqL麻痹后遗症的要药；最新发现其具有阻止乙酰胆碱酶对乙酰胆碱分解的作用，能够逆转失忆，其疗效可达70％，从而可以预防和治疗早老性痴呆症(阿尔茨海默病，AD)。据南方医药经济研究所信息中心统计，加兰他敏的市场销售额增长最大，增幅为500．24％，目前市场上尚未有人工合成品。忽地笑虽然有所栽培，但生长期长，受气候、环境等多方面因素影响，再加上其次生代谢物加兰他敏的含量

2、较低，产品远远不能满足市场的需要，并且价格昂贵。因此利用细胞工程技术对忽地笑进行细胞和组织培养，并筛选高含量加兰他敏细胞系是解决这一问题的途径之一。本文以忽地笑的鳞茎为外植体，对离体快繁做了初步探讨；研究了不同的物理、化学因子对忽地笑愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖以及次生代谢物加兰他敏形成的影响，从而得出忽地笑愈伤组织诱导、愈伤组织增殖和高含量次生代谢物加兰他敏的培养条件；分析了野生忽地笑中加兰他敏的含量。得出了以下结论：1、离体快繁时，不定芽诱导最佳培养基为：MS+NAAl．0mg／l+BAl5rag／l+KT0．4mgn；最佳增殖培养

3、基为；MS+BA20mg／I+IBA0．5m鲫；生根培养基为：MS+NA．AI．Orag／I+BAO．Img,q·2、采用MS、1／2MS以及SI-14：N03一不同摩尔比例的改良船培养基为基本培养基，发现MSlNH．4：N03一=l：25)培养基是愈伤组织诱导和增殖的最佳基本培养基。3、光照条件有利于愈伤组织诱导，适宜于愈伤组织诱导的生长素为2,4-D和IBA的组合，浓度分别为3．0mg／l和1．0mg／1，细胞分裂素为6-BA，浓度为0．3mg／l。4、光照条件，愈伤组织增殖培养基为MSl+2'4一D1．0mg／l+IBA0．1mg／

4、l+6-BA0．1mg／l：黑暗条件，愈伤组织增殖培养基为MSl+2。4一D2．0mg／l+6-BA0．3me／l。光照条件的增殖率要高于黑暗条件，增殖曲线呈“S”型。5、安宁采野生忽地笑中加兰他敏的含量为0．033％，要高于文山采集的忽地笑，可见地域不同加兰他敏的含量也不同。6、MS9(NH4+：N03一--25：25)增殖的愈伤组织中加兰他敏的含量为0．042％，要远远高于MSI增殖的培养基，也高于野生忽地笑中的含量，因此采用二步培养法是获取高含量加兰他敏细胞系最有利的方法。首先再MSl培养基上增殖获取大量的愈伤组织，然后在MS9培养

5、基上诱导获得高含量的加兰他敏。7、蔗糖有利于加兰他敏的积累，浓度在409／l时，加兰他敏的含量最高。关键词：忽地笑组织培养愈伤组织加兰他敏次生代谢物Abstraot：TheplantLycorisaureaHerbisbelongtoAmaryllidaceae．Itsmainsecondarymetabolitegalantlmminewasagoodmedicinetotreatmyastheniagravisandsequelaeofinfantileparalysisinthepast．RecenOystudiessuggesti

6、twascholinesteraseinhibitor,andrestorethememory，theeffectreach70％。SOitCanpreventandtreatalzheimer'sdisease(AD)．Accordingtotheinformationcenterofsouthmedicineeconomicsinstitutestatistics，salesvolumeofgalanthaminegrowsveryfast,theincreasedrangeis500．24％．Atpresentithasnotart

7、ificialsyntheticsinthemarket．LycorisaureaHerbhasthecultivation，butinfluenceofvariousfactorlikegrowthcycle，climate，environment，andthesecondarymetabolitegalanthaminecontentislower,sothepriceisveryexpensive．theproductcannotsatisfythemarket．Usingcellcultureandtissuecultureand

8、selecthighcontentgalanthaminecellisawaytosolvethisquestion．Thisarticletakethebulbastissueculture