《菌种的选育》PPT课件

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1、第二章菌种的选育内容1.菌种的来源2.菌种的选育3.菌种的保藏2.1菌种的来源微生物具有的五大特性1.种类多,分布广;2.比面积大,代谢能力强;3.生长迅速,繁殖快;4.适应性强,容易培养;5.易变异.2.1.1生物物质产生菌的筛选2.1.1.1微生物---生物产物的来源两个成功因素1.产生菌的选择;2.合理的筛选方案几百倍选择性灵敏度2.1.1.2待筛选样品的性质新产物的代谢类型生产工艺方式2.1.1.3筛选方案的设计三种基本的筛选方法：整体生物；2.完整细胞；3.亚细胞制剂举例1：抗细菌的筛选—琼脂扩散法：1.试验菌的制备金黄色葡萄球菌ATCC6538P摇瓶培养调节菌体浓度OD6

2、60为0.32.琼脂板制备琼脂培养基冷却至45~50℃倒平板灭菌1%试验菌冷却或至4℃保存4.琼脂板鉴定或或打孔对照样品标准抗生素供试样品培养抑菌圈观察举例2.抗癌筛选机理许多天然化疗药物是通过使肿瘤细胞的DNA损伤而治疗的作用。方法建立：1.λ噬菌体诱导检测系统：当大肠杆菌溶素原受阻遏状态下的λ原噬菌体因DNA的损伤而释放出来，通过平板法检测完整噬菌体颗粒的生长情况可作出DNA受损情况判断。2.生化诱导BIA法利用一种特别的λ溶素源，在DNA受到损伤时并不释放出病毒颗粒而是形成ß-半乳糖苷酶。可以通过检测酶的化学反应加以判断。分析步骤(BIA)1.指示菌大肠杆菌BR513(ATCC

3、33313)2.指示微生物培养3.指示微生物倒固体检测平板4.将待测发酵液少量（20ul）涂平板5.加入ß-半乳糖苷酶的生色基质混合物（84mg褪蓝RR和14mg6-溴-2萘-β-D-半乳糖吡喃糖苷于2ml二甲基亚砜中），再加入琼脂静置，观察颜色变化情况。6.结果分析2.1.2微生物选择分离的原理和发展选择分离的五个步骤：1.含有微生物材料的选择2.材料的预处理3.所需菌种的分离4.菌种的培养5.菌种的选择和纯化（1）确定研究目标，了解微生物资源状况；（2）掌握物种分布，明确采样材料；研究目标和微生物资源资料确定待选种子的类型。如研究抗菌素，可选择放线菌、真菌、细菌依照资料或专家介绍

4、，结合自己所掌握的知识及工作经验，明确待选种子在自然界的分布情况，确定采样目标。（3）根据待选种子的生理学与生态学特性，确定培养基，选择培养条件与方法。（4）在上述准备工作完成之后，制定具体的筛选方案与操作步骤：进行综合、具体问题分析来决定。2.1.2.1微生物材料的选择采样时要注意的问题气候、水分、空气来源要广结合产品的特点标签：地点、时间、气候等采土地点铲去表层土5~15cm取几十克装入无菌袋中扎袋，记录时间、地点和环境情况尽快分离2.1.2.2材料的预处理如果所需菌种较多可直接分离，如果菌体较少怎么办？1.物理法：加热、过滤、离心等方法2.化学法：加入一些基质。3.诱饵法:诱饵

5、技术:将固体基质加到待测的土壤或水中,待其菌落长成后在涂平板.2.1.2.3所需菌种的分离为了提高分离效率选择合适的培养基、选择性抑制剂的选择、培养条件控制等等。采用给混合菌群提供一些有利于所需菌种或不利于其它菌型生长条件以促使所需菌株大量繁殖，从而利于分离它们，所谓的增殖培养。富集的目的：让目的微生物在种群中占优势，使筛选变得可能。富集的三种方案：定向培养:采用特定的有利于目的微生物富集的条件，进行培养。当不可能采用定向培养时，则可设计在一个分类学中考虑.不能提供任何有助于筛选产生菌的信息，这时只能通过随机分离的办法.定向培养的富集方法1、底物2、pH条件3、培养时间4、培养温度等

6、一切能提高目的微生物相对生长速度的手段，培养（固体、液体；分批连续）后使目的微生物在种群中占优势。2.1.2.4菌种的培养应该注意：各种菌种的培养条件和时间也各不相同。2.1.2.5菌落的选择1.铺菌法；2.复印平板法。从形态的角度菌落的外观形态，是微生物的一个重要表征。如多糖产生菌在适当的培养基上生长，从具有粘液性的菌落外观上就可以初步识别。从产物角度出发在培养时以产物的形成有目的的设计培养基利用简单、快速的鉴定方法，如抗生素2.2工业化菌种的要求1.能够利用廉价的原料，或使用来源丰富的原料.2.菌体温度应适应较高的温度.3.遗传性能要相对稳定4.菌对所采用的设备和生产过程的适应性

7、7.产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学上最好与致病菌无关）5.菌的产物得率和产物在培养基中的浓度6.产物容易从发酵液（细胞）中提取2.3施加选择压力的分离方法1.富集液体培养法:连续培养菌种的筛选比生长速率(u):每克菌体每小时增长的菌体量.u=1/XdX/dt.比生长速率u基质浓度BAr限制性基质培养液当进行流加时基质浓度r时,,B菌先被洗出;2.固体培养基的使用主要适用于初级代谢产物菌株的筛选实例：碱性纤