中药薤白活性成分的分离鉴定及其抗癌活性研究

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1、ZSTUZhejiangSci-TechUniversity硕士学位论文MASTER’STHESIS中文论文题目：中药薤白活性成分的分离鉴定及其抗癌活性研究英文论文题目：StudyonIsolation,IdentificationandAnticancerActivityoftheActiveComponentsfromChineseHerb“Xiebai”学科专业：生物学作者姓名：黄少辉指导教师：欧文斌研究员完成日期：2018年4月18日本研究由浙江省高校生物学重中之重（一级学科）项目与浙江理工大学科研启动

2、基金提供资助浙江理工大学硕士学位论文中药薤白活性成分的分离鉴定及其抗癌活性研究摘要薤白是一种药食两用的中草药，对人体健康和疾病治疗具有多种裨益，为了评估其营养价值和药用价值，使用溶剂提取法分离其两种植物来源，即藠头和小根蒜的游离氨基酸及衍生物，并使用氨基酸全自动分析和超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱进行分析。同时，采用MTT、克隆形成实验、流式细胞术、伤口愈合和细胞侵袭等实验对其甲醇粗提物及部分有活性的化学成分——异甘草素和N-反式阿魏酰酪胺进行体外抗癌活性分析。数据表明，两种植物都含有丰富的游离氨基酸，并

3、且藠头的总游离氨基酸量高于小根蒜。两种植物中的游离氨基酸组成在性质上相似，包括十九种蛋白质氨基酸和四种非蛋白质氨基酸。鉴定的蛋白质氨基酸包括八种必需氨基酸和五种半必需氨基酸。必需氨基酸和半必需氨基酸的总量分别占两种植物总游离氨基酸的64.9％和69.7％。两种植物的主要氨基酸，按浓度从高到低依次是精氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，天冬酰胺和丝氨酸。藠头也富含瓜氨酸和赖氨酸。另外，从两种植物中鉴定出两种氨基酸衍生物，即N-甲基脯氨酸和H-Glu-Tyr-OH二肽。本研究首次报道了葱属植物中存在N-甲基脯氨酸和未加工食物中

4、存在H-Glu-Tyr-OH二肽。我们进一步探讨了鉴别出的活性物质对薤白的风味、营养和健康价值的影响。体外抗癌结果表明薤白甲醇粗提物抑制了肺癌细胞A549和PC-9生长。相对于单独给药对细胞生长、增殖、迁移和侵袭的影响、异甘草素和N-反式阿魏酰酪胺联合给药处理A549和PC-9细胞经调控EGFR/PI3K/mTOR与RAF/MAPK信号通路显示附加的抗癌效果，尤其对EGFR突变体的PC-9细胞，表型影响更为显著。我们的数据表明薤白药物活性成分协同靶向抑制EGFR信号通路有可能为肺癌的临床用药和治疗提供新的治疗策

5、略。关键词：薤白、小根蒜、藠头、异甘草素、N-反式阿魏酰酪胺、抗癌I浙江理工大学硕士学位论文中药薤白活性成分的分离鉴定及其抗癌活性研究AbstractXiebaiisanedibleChineseherbalmedicinethathasvariousbenefitstohealthandtreatment.Inordertoevaluateitsnutritionalandhealthvalue,solventextractionwasusedtoseparatefreeaminoacidsandderiva

6、tivesfromitstwoplantsources,namelyAlliumchinenseG.DonandAlliummacrostemonBunge,andaminoacidautomatedanalysisandultraperformanceliquidchromatography-quadrupole-timeofflightmassspectrometrywereusedtoanalyzethesemolecules.Inaddition,MTTassay,colonyformationassa

7、y,flowcytometry,woundhealingandcellinvasionassayswereusedtoanalyzetheanti-canceractivityofitscrudemethanolextractandsomeofactivechemicalcomponents(i.e.,isoliquiritigeninandN-trans-feruloyltyramide)invitro.Ourdatashowthatbothplantsarerichinfreeaminoacids,andt

8、hetotalfreeaminoacidcontentofA.chinenseG.DonishigherthanthatofA.macrostemonBunge.Thefreeaminoacidcompositioninbothplantsissimilar,includingnineteenproteinaminoacidsandfournon-proteinaminoacids.T