彩色马蹄莲病毒的分子检测和鉴定

《彩色马蹄莲病毒的分子检测和鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、甘肃农业大学硕士学位论文彩色马蹄莲病毒的分子检测和鉴定姓名：马书智申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：徐秉良20060601甘肃农业^学2006扁f匝士论卫摘要彩色马蹄莲(Cal】alily，压Ⅳ结如yo枇5印)是世界驰名的切花，广泛分布于世界各地。近几年来，随着我国彩色马蹄莲栽培规模不断扩大和从国外大量引种，导致彩色马蹄莲遭受病毒侵染和褒退的现象越来越严重。然而，目前在国内关于彩色马蹄莲病毒瘸的报道很少，因此对其进行研究，以及建立一套快速、准确的彩色马蹄莲病毒检测技术，对搞清彩色马蹄莲病毒痛害的组培脱毒、有效防治、种苗检疫以及增加出

2、口创汇将具有很重要的现实意义。奉研究运用生物学和分子生物学的方法对侵染甘肃省部分地区彩色马蹄莲的植物病毒进行了系统研究。研究的主要内容包括调查了解彩色马蹄莲病毒病的发生和侵染情况、通过电镜观察海芋嵌纹病毒(zaMV)的粒子形态及内含体的有无和形态、植物总砌qA的提取及RT．PcR检测体系的建立、外壳蛋白基因的克隆和同源性分析。结果表明zaMV是在自然环境。F侵染甘肃省彩色马蹄莲的主要病毒，它属于马钵薯Y病毒属。fIj间调查发现甘肃省彩色马蹄莲普遍受到病毒侵染，在嘉峪关市温室种植区发病最为严重，发病率高达80．9％，而在榆中县和临洮县发病率相对

3、较低，分别为28．1％和27．5％，而且彩色马蹄莲病毒病症状相当复杂，主要有花叶、斑驳、畸形等。寄主反应试验表明：侵染彩色马蹄蓬的植物病毒的寄主范围很窄，主要侵染天南星科植物，所以难以通过寄主反应对它们进行鉴定。电镜检测结果表明：在38个样品中有20个样品被线状病毒侵染，侵染率达52+6％；组织病理学观察结果显示：在20个被线状病毒侵染的样品中有12个样品检测到风轮状内含体，表明受到马铃薯Y病毒属cPo∽fr淞)病毒成员的侵染，侵染率达60％。通过提取感病彩色马蹄莲叶片组织中的总RNA，并设计特异性引物进行RT．PcR扩增，然后进行基因克隆，

4、获得zaMV病毒表壳蛋白(CP)的基因序列。结果显示zaMv的克隆片断全长为833bp，其中CP基因由579bp的组成，另外有254bp组成的3。-末端非编码区。对zaMV同马铃薯Y病毒属一些种和己知的zaMv进行同源性比较和进化树分析表明，西【Mv的CP序列和马铃薯的Y病毒属成员之间核蕾酸有56．O％一一62．4％的同源性，氨基酸有51，8％～62．1％之间的同源性。而且同源性分析的结果也显示zaMv与李痘病毒(PPv)和芜菁花叫病毒(Tu~Ⅳ)属于同族，而与zaMv和芋花叶病毒(DSMv)这两种能同时侵染天南星科植物的病毒在并不表现出亲缘

5、关系，几乎没有同源性，这些结果和已经报道的结果相一致。zaMv和国内外已经报道的zaMv相比，有93％以上的I十肃农业大学2006届硕士论文同源性，而且大多数氨基酸的改变发生在3’-uTR区。研究结果表明，z小Ⅳ完全是一个未知的侵染彩色马蹄莲植株的马铃薯Y病毒属特殊的种，它能够引起甘肃省彩色马蹄莲严重的病毒病，因此我们定义它为海芋嵌纹病毒彩色马蹄莲株系(zaMV．Zall)。关键词：彩色马蹄莲；海芋嵌纹病毒；电子显微技术；RT-PcR检测体系：基因克隆；序列同源性分析II甘肃农业大学2006届硕士论文MolecularDetectionand

6、IdentificationofVirusInfectingCaUaLilySummarvCallalily(历胛f已如sc向池点倒isa胁nousnowercrop，Widelycultivatedthmu曲outtheworld．Inrecentyears，w“hnewvarietiesintroducedintoGansuprovince，China，viraldiseaseoccurredina11theseareaswherecallalilywasplaIlted．Andtheinnuenceofviraldiseasehadbe

7、enbecOmemoreandmoreobvious．However．researchworkonvirusesinfectiIlgcallalilyremainedscarcityinCllina．So，studyingontheViraldiseasesofcallalilyhad掣eatlymeoreticaIandactuaIsignificance．Inthispaper，vi蹦pamogennatur棚yoccu玎cdoncallalilycmpswasidentifiedsystemicallybybiologicala11dm

8、oleculartech_Iliques，whichcan1aya血eoreticalfouIldationforproducingofcalla1ilyVims舌