毕赤酵母工程菌ZLHY6发酵条件优化

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1、生物工程粮油食品科技第22卷2014年第2期毕赤酵母工程菌ZLHY6发酵条件优化1，2131张来忠，孙长坡，吴子丹，伍松陵(1．国家粮食局科学研究院，北京100037;2．河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;3．国家粮食局，北京100038)摘要:以筛选得到的活性强并导入玉米赤霉烯酮降解酶基因的重组毕赤酵母ZLHY6为出发菌株，通过响应面法优化培养基。结果表明:经过对增殖培养基BMGY的优化，获得适合毕赤酵母ZLHY6生长的最优培养基配方:3．5%甘油、0．65%酵母提取物、10%磷酸钾缓冲液、1．25%硫酸铵、0．45%硫酸镁、0．04%硫酸钙。关键词:玉米赤霉烯酮;降解酶;培

2、养基优化中图分类号:TS201．3文献标识码:A文章编号:1007－7561(2014)02－0100－04OptimizationoffermentationconditionsforrecombinantPichiaPastorisZLHY61，2131ZHANGLai－zhong，SUNChang－po，WUZi－dan，WUSong－ling(1．AcademyofStateAdministrationofGrain，Beijing100037;2．CollegeofBiologicalEngineering，HenanUniversityofTechnology，Zhengzhou

3、Henan450001;3．StateAdministrationofGrain，Beijing100038)Abstract:Thestrongvitalitystrains，importedwithzearalenonedegradingenzymegene，wereselectedasinitialstrains，andthemediumwasoptimizedbyresponsesurfaceanalysis．TheresultsindicatedthattheoptimalmediumsuitableforPichiaZLHY6was3．5%glycerin，0．65%yeaste

4、xtract，10%buffersolu-tionofpotassiumphosphate，1．25%ammoniumsulfate，0．45%magnesiumsulfate，0．04%calciumsulfatebyoptimizationofmultiplicationmediumBMGY．Keywords:zearalenone;degradingenzyme;mediumoptimization玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)是由禾谷镰由于使用的培养基成本较高，不适合工业化生产。本刀菌、克地镰刀菌、黄色镰刀菌等多种镰刀霉菌产生试验以筛选得到的活性强并导入玉米赤霉烯酮降

5、解［1］的次级代谢产物。ZEN主要污染谷物及农副产酶基因的重组毕赤酵母ZLHY6为出发菌株，通过响品，是世界上污染范围最广的真菌毒素之一，具有类应面法优化试验，对毕赤酵母的基础生长培养基进行雌激素作用，会产生很强的生殖毒性以及致畸、致癌优化，以得到培养基成分的最优配比，为降低生产成作用，会导致动物生殖障碍、内分泌系统紊乱。本，简化培养基繁琐的配制过程奠定基础。目前，真菌毒素的去毒方法从原理上可分为脱毒1材料与方法和解毒，按方法手段可分为物理、化学、生物方法三大1．1材料类，其中，生物手段以其反应条件温和、解毒彻底无残1．1．1主要仪器ECOTＲON型恒温摇床:瑞士留以及无二次污染等优点日益成

6、为近年来科技界研INFOＲS公司;EVOLUTION300全波长分光光度计:究的热点。目前国内外有人已从霉菌、酵母菌、细菌［2－8］Thermo公司;WH220型加热磁力搅拌器:荣华科学等菌株中获得了降解ZEN的基因，利用现代分仪器有限公司。子生物学技术，将其导入基因工程菌，并实现高效表1．1．2主要试剂甘油、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、达，应用于需要消减ZEN的各个行业。［9］硫酸铵、硫酸镁、硫酸钙、蛋白胨、葡萄糖、酵母提取刘海燕等于2011年获得玉米赤霉烯酮降解酶物均为国产试剂，购于西陇化工股份有限公司。基因ZLHY6，并实现了在毕赤酵母中的高效表达。但1．1．3试验菌株导入玉米赤霉烯酮降解

7、酶基因收稿日期:2013－10－09基金项目:国家重点基础研究发展计划(2013CB127805);科研院所的重组毕赤酵母ZLHY6由本实验室构建并保存。技术开发研究专项资金(2012)1．2方法作者简介:张来忠，1986年出生，男，在读硕士．通讯作者:伍松陵，1967年出生，女，高级工程师．1．2．1毕赤酵母ZLHY6生长曲线测定种子液制100粮油食品科技第22卷2014年第2期生物工程备:从新鲜平板上挑取