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1、12实用预防医学2011年1月第18卷第1期PracticalPreventiveMedicine,Jan.2011,Vol18,No.1文章编号:1006-3110(2011)01-0012-03【论著】多重PCR检测铜绿假单胞菌耐药基因1111212何露,曾凡胜,范珍明,郭劲霞,黄烈,杜兆丰,陆学东摘要:目的了解铜绿假单胞菌耐药现状。方法采用多重PCR方法检测铜绿假单胞菌中的常见耐药基因。结果39株铜绿假单胞菌耐药基因TEM、AmpC、VIM阳性率分别为84.6%、76.9%、17.9%,O
2、XA基因扩增阴性。铜绿假单胞菌对替卡西林、妥布霉素、环丙沙星、头孢他啶耐药率均大于28.2%(11/39),耐药率最高为庆大霉素59.0%,对多粘菌素E最敏感92.3%,本组菌株中有25.6%(10/39)表现为多重耐药。结论研究表明,携带TEM、AmpC、VIM是导致本组铜绿假单胞菌耐药的重要机制β,-内酰胺类抗生素耐药性及多重耐药性均较严重。关键词:铜绿假单胞菌;多重PCR;耐药基因中图分类号:R44615文献标识码:AAnalysisonResistanceGenesofAntibioti
3、csfromPseudomonasaeruginosabyMultiplexPCRHELu,ZENGFan-sheng,FANZhen-ming,etal.(YiyangMedicalCollege,Yiyang413000,Hunan,China)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheresistancesituationofPseudomonasaeruginosainShenzhen.MethodsThecommonantibioticresistancege
4、nesinPseudomonasaeruginosaweredetectedbymultiplexPCRandE-teststrips.Re2sultsTEMwasdetectedin39stains(84.6%).Amongthem,VIMwasfoundin17.9%(7stains)andAmpCin76.9%(30stains).Thesusceptibilityresultsofantibioticsshowedthattheresistantratesofticarcillin,to
5、bramycin,ciprofloxacin,andceftazidimewereallbeyond28%.Theresistantratetogentamicinwasthehighest(59.0%).Themoresensitiveantibioticwasamikacin.ConclusionsThestudyindicatedthatthesePseudomonasaeruginosacarriedgenesofTEM,AmpC,andVIM,whichwastheessentialr
6、esistancemechanismofPseudomonasaeruginosainlocalarea.MultidrugresistanceandBeta-lactamantibioticsareseverity.Keywords:Pseudomonasaeruginosa;MultiplexPCR;Resistancegenes铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa,Pa)是临床常见的铜绿假单胞菌ATCC27853。条件致病菌之一,已经出现一部分对亚胺培南和三代头孢菌素1
7、13药敏试验采用ATBPSE-5药敏试条进行10种药物的多重耐药Pa。为了解Pa的耐药情况,遂对2009年10月-敏感性试验。2010年9月深圳市第四人民医院住院患者分离到的39株Pa,114多重PCR扩增参照Axygen试剂盒方法提取铜绿假单进行TEM、OXA、AmpC、VIM等相关耐药基因检测及药敏试胞菌DNA,分析TEM、OXA、AmpC、VIM基因组保守区,根据验,现将结果报告如下。保守区基因序列利用Primer5.0软件设计多重PCR引物(引物[1～3]序列见表1),多重PCR扩增方法
8、参照曾凡胜等的报道,采1材料与方法用10μl反应体系,PCR产物做1%琼脂糖凝胶电泳,紫外凝胶111主要试剂与仪器PCRMasterMix试剂(Fermentas公成像仪分析并记录结果。司)、耐药基因引物(Invitrogen公司合成)、PCR仪(PTC-200,表1多重PCR引物序列及扩增片段长度美国)、DNA提取试剂盒和DNA凝胶纯化试剂盒(均购自Axy2基因上游引物(5’-3’)下游引物(5’-3’)产物长度gen公司)、凝胶成像系统(Bio-Rad公司)、药敏纸片及MH平板(英国Oxio
