奶牛新孢子虫病分子生物学检测方法的研究

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1、分类号：密级：学号：2009103045单位代码：10759石河子大学硕士学位论文奶牛新孢子虫病分子生物学检测方法的研究研究生唐慧芬指导教师季新成副研究员申请学位门类级别理学硕士学科、专业名称生物化学与分子生物学研究方向免疫与育种所在学院生命科学学院中国〃新疆〃石河子2012年6月ResearchofmolecularbiologydetectionmethodforNeosporosisADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofNatu

2、ralScienceByTangHui-fen(ImmunizationandBreeding)DissertationSupervisor:associateResearcherJiXin-chengShihezi·Xinjiang·ChinaJune,2012本研究由国家质量监督检验检疫总局科研项目（项目资助编号：2009IK011和2011IK017）提供资助Supportedby:GeneralAdministrationofQualitySupervision,InspectionandQuarantineofP.R.China（NO.2009IK011and2011IK017）学位

3、论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日学位论文版权授权书本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名

4、：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要目的：新孢子虫病（Neosporosis）是由犬新孢子虫（Neosporacaninum）寄生在宿主体内所引起的一种多种动物共患的血液原虫病。该病不仅对狗等动物造成危害，对牛的危害尤为严重，现已确证，它是世界上许多地区造成奶牛流产、产弱胎、死胎和木乃伊胎的主要原因之一。目前，还没有能够预防治疗新孢子虫病的有效药物和疫苗，故对该病的早期检测是有效防控该病的重要手段。方法：本研究根据GenBank上发表的牛新孢子虫NcSAG1基因、Nc5基因、NcSRS2基因和牛性腺（prolactin）基因设计四对特异性引物，以NcSAG1基因、Nc5基因和NcSRS2基

5、因作为目的基因对牛新孢子虫进行检测，以牛性腺基因扩增的片段作为内标对反应过程进行监测，建立了含内标监控物的新孢子虫病多重PCR检测方法；根据GenBank上发表的牛新孢子虫Nc5基因序列和弓形虫GRA6基因序列，设计合成两对特异性引物和两条荧光探针，建立了同时检测新孢子虫病和弓形虫病的双重荧光定量PCR检测方法；根据新孢子虫NcSAG1基因、Nc5基因、NcSRS2基因、牛性腺基因和弓形虫GRA6基因，设计合成相应的五对特异性引物和五条芯片寡核苷酸探针，将各自的标有荧光染料的PCR产物变性后与芯片上的寡核苷酸探针杂交，建立了以牛性腺基因为内标、弓形虫GRA6基因为对照的新孢子虫病多基因芯片检测

6、方法。结果：本研究成功地建立了新孢子虫病的三种分子生物学检测方法。结论：试验表明，这三种方法均具有良好的特异性、敏感性和重复性，且三种方法都涉及到多个基因，使结果更为准确和全面，可根据检验检疫的实际需要，选择相应的检测方法，为该病的高效、准确、快速检测提供了较好的技术支持。关键词：牛新孢子虫病；多重PCR；荧光定量PCR；内标；基因芯片IIIAbstractObject:Neosporacaninumisaprotozoathatcancausetoablooddiseaseforavarietyofanimalsbyparasitesintheirbodies.Thediseaseishar

7、mfulfordogsandotheranimals,especiallyforcows.Itisoneofthemainreasonstomakecowswithabortionorhavingweakfetal,stillbirthandmummifiedinmanypartsoftheworld.Currently,Therehasnoeffectivedrugsandvaccinestop