共振光散射光谱的校正及其分析应用研究

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1、西南师范大学硕士学位论文共振光散射光谱的校正及其分析应用研究姓名：杨传孝申请学位级别：硕士专业：分析化学指导教师：黄承志2003.6.1-I垒'Jr．Jr要共振光散射光谱的校正及其分析应用研究学科专业：分析化学指导教师：黄承志教授论文摘要研究方向：纳米材料及生化分析研究生：杨传孝共振光散射技术是基于普通荧光分光光度计所丌发出来表征超分子组装化学及其分析应用研究的新技术。应用该技术已建立了高灵敏的测定核酸、蛋白质、痕量会属离子、表面活性剂的分析办法，表征]’分子聚集的光谱特征和核酸的超螺旋结构。本文在讨论A1”．DNA、镁试剂I．阳离子表面活性剂、固红VR-蛋白质、丽春红0一蛋白质四

2、个体系的RLS光谱特征的基础上，证明荧光分光光度计的仪器条件和样品的分子吸收等因素会影响共振光散射(RLS)光谱的形状．降低检测的灵敏度。在此基础上本文引入校正因子建立了RLS光谱校正理论，并在普通荧光光度计上引入吸收装置测定分子吸收，根据同一台仪器所测定的数据讨论了固红VR-蛋白质、丽春红G．蛋白质和meso．四-(对三甲氨基苯基)卟啉(TAPP)．DNA体系的RLS光谱的校正。在pH2．2l的酸性介质中，A13+与脱氧核糖核酸(DNA)发生静电作用产生以291．0nm为特征峰的共振光散射(RLS)增强光谱。A13+没有生色基团．它与DNA作用的RLS光谱受光吸收的影响小．因而A

3、13+用于DNA测定的灵敏度高，线性范围宽。在pH6。09和离子强度为0。03moltL的条件下，阳离子表面活性荆氯化十四烷基苄基二甲铵(Zeph)、溴化r六烷攮：三ql铵(CTMAB)与镁试剂l钓相互作用使其共振光散射(RLS)增强，产，l以470．0tim、485．0帆和495：0n／ll为特征峰的RLS信号。方法成功用于合成样和自来水样的测定。＼厂上述试验表明散射光谱随体系的分子吸收和仪器条件的变化而发生变化，因此类似荧光光谱的校正那样，通过引入校『F因子，校J下仪器因素和体系中分子吸收的内滤效应。在酸性介质中．偶氯染料固红VR(FastredVR，FRV)和丽春红G(Pot

4、iceauG，PO)与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋(21(HSA)、溶菌酶(Lys)、7-球蛋白“一IgG)等蛋白质作用产生共振光散射(RLS)增强信号，最大散射峰分别位于287．0tim和288．0nrll处。FRV和PG用于测定BSA、HSA、Lys、Y-IgG的检测限均在25．0ng／ml以下。方法成功的应用于合成样和人血清样品的测定，测定结果与考马斯亮蓝法一致。用吸收装置改变荧光分光光度计入射光的光路直接测得FRV．蛋白质和PG一蛋白质复合物的分子吸收，用校证因子校正FRV．蛋白质和PG．蛋白质体系的RLS强度。研究表明，校正由于分子对激发光和散射光的吸收对RLS光谱

5、的影响后，校正共振光散射(CRLS)光谱灵敏度可提高2倍左右。共舅l光散射光谱的校正及其分析应mml-Je分别在F-2500和F-4500荧光分光光度计上对meso．四-(对三甲氨基苯基)卟啉(TAPP)与DNA作用的RLS光漕进行校jF。校正强度后，灵敏度有显著提高。引入散射系数强(劫，并成功的把表观吸收光谱中的散射和吸收成分分离。研究发论文摘要StudiesontheCorrectionofResonanceLightScatteringSpectraandTheirAnalyticalApplicationsMajor：AnalyticalChemistrySuperviso

6、r：ProfessorChengzhiHuangReseareh：nanometermaterialandbiochemicalalialysisAuthor：ChuanxiaoYangABSTRACTResonancelightscatteringtechniqueisanewelyestablishedtechniqueforcharacterizingsupramolecularassembliesandtheiranalyticalapplicationsdevelopedbyacommonspectrofluorometer．Withthistechnique，wehav

7、eproposedhighlysensitiveanalyticalmethedsofDNA，proteins，traceamountmetallicionsandsurfactants，characterizedthecharacteristicspectrumofmolecularaggregation，andthestructureofthesupramoleculardouble-strandedDNA．ByexaminingRLSspectralfeatur