2011分光光度计性能检查

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1、哈尔滨医科大学实验一可见分光光度计性能检查刘丽燕哈医大公卫学院一、实验目的二、实验原理三、试剂与器材四、仪器的使用方法五、实验步骤主要内容1、掌握T6新悦-可见分光光度计主要性能的检定方法和仪器的使用。2、熟悉仪器的主要性能和技术指标。3、了解仪器的基本结构。一、实验目的紫外－可见分光光度法（ultraviolet-visiblespectro-photometry,UVS）是根据物质的分子对紫外可见光区辐射的吸收特征和吸收程度，对物质的组成进行定性或定量及结构分析的方法。Lambert-beer定律是分光光度法定量分析依据。A=εbc可见光区400～760nm紫外光区200～400

2、nm二、实验原理结构示意图：光源→单色器→样品池→检测器→信号显示装置一、主要部件（一）光源：可见分光光度计→钨灯λ=320-2500nm紫外分光光度计→氢灯，氘灯λ=150-400nm（二）单色器：将光源连续光谱按波长顺序色散并选出所需单色光。（三）吸收池：普通玻璃和石英玻璃。（四）检测器：光信号变成电信号（光电管、光电倍增管）。（五）信号显示装置：将输出信号经处理转换成透光度或吸光度再显示或记录下来。二、实验原理1、试剂：氯化钴溶液2、6、10mg/ml。2、器材：T6新悦－可见分光光度计玻璃吸收池；100ml烧杯；镜头纸；滤纸；一次性吸管三、试剂与器材四、仪器的使用方法1、开机

3、：打开电源，仪器初始化，约3min完成。预热1h。2、选择测量模式：在初始化完成之后，系统默认进入吸光度测量界面。如果要进行透光度或定量测量，可以按MODE键进行切换。※3、设置测量波长：在测量界面下，按GOTOλ键在数字键盘上键入波长数值按ENTER键4、设置吸收池模式和个数：按SHIFT/RETURN键，切换至系统应用界面。（1）按上翻键，设置吸收池类型：1CELL——固定池，只有一个吸收池可用于测量。5CELL——五联池，最多有五个吸收池可用于测量。8CELL——八联池，最多有八个吸收池可用于测量。（2）按下翻键，设置吸收池个数。例如：如果实验需要6个吸收池进行测量，那么吸收池

4、类型应设置为8CELL，吸收池个数设为6。注意：1、设定的吸收池个数不应大于实际中所用到的吸收池个数，因为：多余的吸收池位置，仍然会有入射光通过，此时光线直接进入到检测器中，强度比较大，容易使检测器疲劳。2、设置吸收池个数的正确操作是按下翻键进行选择，而非在数字键盘上键入。如键入2，钨灯将被关掉。5、自动校零：按SHIFT/RETURN键，切换到测量界面。在1号吸收池中放入空白溶液，按ZERO键进行空白校正。注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成之后，样品测量之前进行；同理，如果在测量过程中需要改变参数，那么在参数设置完成后，要再次进行空白校正。6、测量样品：从2号吸收池开始

5、，依次放入样品，按START键，仪器测量全部样品，然后显示出最后一个样品的吸光度值。读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值。7、打印结果：在已连接打印机的情况下，按PRINT键打印数据。8、结束测量：按SHIFT/RETURN键，从读数界面返回测量界面，关闭电源。注意：关电源后，系统中存储的数据结果将丢失。测量全部完成后，切换到测量界面，然后关闭仪器电源。用蒸馏水清洗吸收池，倒扣于滤纸上晾干；如果吸收池污染严重，冲洗后置于70％～80％的酒精中浸泡。将用过的仪器、试剂等放回原位。五、实验步骤1、仪器外观检查2、稳定度检测3、波长准确度（校正）与波长重复性4、线性误差检查5、透光度重现性

6、检定6、杂散辐射率7、吸收池的配套性检定1、仪器外观检查2、稳定度检测零点稳定度：波长设置500nm，将吸收池推杆推至最顶端，按“zero”键，调节吸光度为0，观察3min，记录读数。示值的最大漂移量，即为零点稳定度。技术指标：0.002/3min四、实验步骤3、波长准确度（校正）与波长重复性：（1）波长准确度（校正）系统自动检测内置镨钕玻璃片808.0nm的特征波长，时间大约1min。检测完成后，系统显示实测波长值。Δλ=λ示-λ808＞1nm时，按enter键校正，Δλ=λ示-λ808＜1nm时，不需波长校正，按▼键，再按enter，系统返回系统应用界面。开机，预热按SHIFT/

7、RETURN按数字键9（2）波长重现性检定以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶液(6mg/ml)在510nm处的吸光度（英文缩写为A或ABS）。逐一作3次测量，记录吸光度值。代入公式计算波长重复性,并绘制波长吸收曲线。结果分析：重现性应小于δλ≤±0.4nm。注意：①吸收池不得有气泡。②倒溶液至三分之二处即可。4、线性误差检查：测量界面。（1）设置波长键：λ=510nm（2）设置吸收池个数：（3）空白校正：（4）测量：将2、6、10mg/ml的CoCl2溶液分