葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达影响的研究

《葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达影响的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、-l，山人学硕士学位论文葡萄糖对人鼠腹膜问皮细胞VEGF及其受体表达影响的研究葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞VEGF及其受体表达影响的研究硕士研究生：王雅宁导专师：郭群英副教授业：内科学中文摘要腹膜透析是终末期肾脏病一体化治疗的重要组成部分。在长期的腹膜透析中，腹膜结构和功能的改变与腹膜血管生成密切相关。血管增生可导致腹膜有效表面积增大、血管通透性增高，溶质转运增加、超滤能力下降，最终腹膜功能丧失。越来越多的证据表明，腹腔局部血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)的上调就是其中心环节。而透析

2、时高浓度葡萄糖透析液的应用、葡萄糖降解产物(GDPs)、糖基化终产物(AGEs)、腹腔慢性炎症状态均可上调腹腔局部VEGF的表达。VEGF主要通过与其受体VEGFRI(F1t-1)、VEGFR2(Flk-1／KDR)结合发挥生物学效应。除了内皮细胞，VEGFRl在滋养层细胞、单核细胞、肾小球系膜细胞也可表达；VEGFR2则可表达于造血干细胞、巨核细胞及视网膜祖细胞。此外，Flt-1基因尚编码一种可溶性的形式(sFlt一1)，其仅由选择性剪接的6个Ig区域组成，sFlt-1与VEGF有很强的亲和性，与之结合后即阻断VEGF一系列分子生物学效

3、应。sFlt-1具有分泌性，主要表达于内皮细胞，少量表达于单核细胞、造血细胞。然而，大鼠腹膜间皮细胞能否表达VEGFRI、VEGFR2及sFlt-17文献鲜见报道。因此，我们设计了如下实验：1．首先用90mmol／L葡萄糖刺激体外培养的大鼠腹膜间皮细胞，观察其对VEGF及其受体VEGFRl、VE6FR2及sFlt-1核酸表达的时间变化；2．分别用30、60、90mmol／L葡萄糖刺激大鼠腹膜间皮细胞，90mmol／L甘露醇作渗透压对照，观察其对VEGF和VEGFRl、VEGFR2、sFlt-1的影响。II

4、l山人学颂I：学tc7：论文带j

5、萄糖对大鼠腹膜fG】J支细胞VEGF及其受体表达影响的研究一、高糖对大鼠腹膜间皮细胞VEGF及其受体mRNA的影响(一)目的探讨90mmoi／L葡萄糖刺激大鼠腹膜问皮细胞后，VEGF及其受体核酸水平的时间变化曲线。(二)方法分离、培养SD雄性大鼠腹膜问皮细胞，常规传代及鉴定，第二代细胞用于实验研究。90mmol／L葡萄糖作用于细胞，RT．PCR检测不同时问点(O，O．5h，2h，8h，12h，24h，48h)VEGF及其受体VEGFRI、VEGFR2及sFlt．1mRNA水平的变化。(三)结果1．培养的大鼠腹膜问皮细胞融合后，具有典型的鹅

6、卵石状或铺路石样上皮细胞形态。传代后用抗大鼠Keratin、抗Vimentin抗体检测相关抗原，结果显示细胞抗大鼠Keratin、Vimentin表达阳性。2．常规培养的大鼠腹膜问皮细胞在核酸水平表达VEGF及受体VEGFRl、VEGFR2、sFlt—l。90mmol／L葡萄糖刺激后，VEGF和VEGFR2mRNA表达水平下降，以12小时为最低；sFlt—l和VEGFRlmRNA呈现先升高、降低后升高的趋势，在24小时到达高峰。(四)结论90mmolFL葡萄糖刺激后，VEGF和VEGFR2mRNA表达下降；sFlt．1和VEGFRlmRN

7、A呈现先升高后降低的趋势，24小时为表达高峰。二、不同浓度葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞表达VEGF及其受体的影响(一)目的探讨不同浓度葡萄糖刺激下，大鼠腹膜问皮细胞VEGF及其受体表达的变化。(二)方法分别用30mmol／L(低糖组)、60mmol／L(中糖组)、90mmol／L葡萄糖(高糖组)刺激大鼠腹膜问皮细胞，90mmol／L甘露醇作渗透压对照(甘露醇组)，DMEM低糖培养基做对照(对照组)，刺激24小时，以RT—PCR检测核酸水平的变化；ELISA检测细胞培养上清中VEGF、sFlt-I蛋白质表达水平，Westernl

8、l山人学硕+I

9、：学位论文葡萄糖对人鼠腹膜问皮细胞VEGF及其受体表达影响的研究Blot检测VEGFRl、VEGFR2的蛋白质变化。(--)结果1．低糖组VEGFmRNA的表达显著高于对照组(p<0．05)，而高糖组VEGFmRNA的表达显著低于对照组(pO．05)；2．低糖组、中糖组、高糖组VEGFRlmRNA表达均显著高于对照组(p均<0．01)，高糖组显著高于中糖组及其他各组(p均

10、高糖组sFlt一1mRNA表达均高于对照组(p均