组培实验报告胡萝卜愈伤组织诱导培养

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1、本科学生综合性实验报告学号姓名学院专业、班级实验课程名称植物组织培养实验教师及职称开课学期2013至2014学年第二学期填报时间2014年06月20日云南师范大学教务处编印一、实验设计方案实验名称：胡萝卜愈伤组织的诱导培养实验时间：实验室：1．实验目的（1）通过本次实验，使学生进一步熟悉配制培养基的流程及操作中应注意的事项，学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导培养基配方。（2）能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。（3）能够熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术。（4）进一步熟悉配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基；掌握

2、愈伤组织状态的调控手段，设计适合的使愈伤组织增殖快、结构疏松的增殖培养基，以便能培养出下次细胞培养的材料。（5）熟练掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。2．实验原理、实验流程或装置示意图实验原理：①胡萝卜愈伤组织的诱导培养：培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或

3、更高。②胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制：将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。③胡萝卜愈伤组织的诱导：将胡萝卜的贮藏根（根的变态）表面消毒后切割成小块在无菌条件下接种于愈伤组织诱导培养基上，诱导外植体脱分化产生愈伤组织。④胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制：将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。⑤胡萝卜愈伤组织的继代培养：将由胡萝卜肉质直根诱导产生的愈伤组织剥离转接到愈伤组织增殖培养基

4、上培养，即可实现愈伤组织的增殖。实验流程：2-1MS培养基母液和常用试剂的配制2-2胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制2-3胡萝卜愈伤组织的诱导2-4胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制2-5胡萝卜愈伤组织的继代培养3．实验设备及材料（1）、MS培养基母液和常用试剂的配制：冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0），电磁炉、电热恒温干燥箱、硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘

5、氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、6-BA（6-苄基腺嘌呤）、KT、浓盐酸、氢氧化钠、浓硫酸、重铬酸钾、95%酒精、蒸馏水等。（2）、胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制：冰箱、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、烧杯、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、封口膜、橡皮筋/棉线、电炉/电磁炉、高压蒸汽灭菌锅、MS培养基母液（大量元素、微量元素、铁盐、有机物）、琼脂、蔗糖、生长调节物质（2,4-D、6-BA、KT）、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH。（

6、3）、胡萝卜愈伤组织的诱导：酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、超净工作台、恒温培养箱、胡萝卜愈伤组织诱导培养基、无菌水、75％酒精、0.1%HgCl2、胡萝卜肉质直根（4）、胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制：冰箱、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、烧杯、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、封口膜、橡皮筋/棉线、电炉/电磁炉、高压蒸汽灭菌锅、MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH（5）、胡萝卜愈伤组织的继代培养：酒精棉球、小块纱布、已灭

7、菌培养皿和滤纸、枪状镊子、解剖刀、酒精灯、超净工作台、愈伤组织继代培养基、75％酒精、处于脱分化进程中的外植体4．实验方法步骤（1）、MS培养基母液和常用试剂的配制1.1MS培养基母液的配制：母液的配制有两种方法：一种是配制成单一化合物母液。此法适合配制多种培养基都需要的同一种母液。另一种是配成几种不同化合物的混合母液。此法在大量配制同种培养基时省时省力。由于MS培养基较为常用，故配制MS培养基母液。配好的母液应放在试剂瓶中贮存。在配制MS培养基母液时，为减少工作量可以把几种药品（如培养基中的大量元素或微量元素）配在同一母液中，但应注意各种化合物的组合以及加

8、入的先后顺序，以免发生沉淀。通常把每种试剂单独溶解后