血液实验-血液病的诊断

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1、实验九、白血病的实验室诊断（设计性实验）北华大学医学院血液检验教研室实验目的1、通过实验初步了解临床白血病的诊断和鉴别诊断的步骤和流程。2、熟悉血细胞化学染色的方法、结果判断和临床意义。实验安排学生根据病例，设计实验室诊断流程教师指导学生实验的选择、操作学生根据实验结果，诊断疾病教师总结实验给出病例，病例讨论病例某患者，男，27岁，近一个月经常小腿痛，三天前突然高热39.5℃，服药无效后前来就医，贫血貌，查体：口腔粘膜有溃疡，颈部有出血点，胸骨压痛，淋巴结肿大。白血病典型的临床特征：发热、贫血、出血、组织浸润出血点

2、血常规Hb：67g/LWBC：96×109/L涂片中有大量原始细胞,占52%。PLT：75×109/L白血病的诊断鉴别诊断的步骤结合临床症状,怀疑患者是白血病血常规、血象检查骨髓象检查细胞化学染色染色体检查细胞免疫检查骨髓活检骨髓象检查实验材料:患者骨髓涂片实验方法:瑞氏染色显微镜检查步骤1过氧化物酶染色临床应用：鉴别急性白血病类型实验原理：过氧化物酶可以使过氧化氢释放出新生态氧，氧使无色的底物四-甲基联苯胺氧化成蓝色，该物质又自行氧化成棕色或棕黑色化合物，固定在酶存在的部位—胞浆中。步骤24-甲基联苯胺法

3、试剂1、四-甲基联苯胺混合试剂：取1%TMB乙醇溶液5ml，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液50μl，混匀。2、稀过氧化氢（新鲜配置）3、瑞氏染液材料患者新鲜骨髓涂片操作步骤1、取新鲜干燥的骨髓涂片，滴加新配置的四-甲基联苯胺混合试剂0.5ml，1分钟。2、再加稀过氧化氢溶液0.7ml，混匀，染色6分钟。3、倾去染液，待干，瑞氏染液复染15~20分钟。4、流水冲去染液，待干，镜检。注意事项1、血片或骨髓片必须是新鲜的，否则，过氧化物酶活性会下降。2、过氧化氢必须新鲜配置，浓度适当。3、四-甲基联苯胺有毒，避免接触皮肤。结果判断1

4、、阴性：胞浆中无棕黑色颗粒（如：急淋）2、弱阳性：胞浆中细小的兰色颗粒，分布稀疏（如：急单）阳性：胞浆中棕黑色颗粒稍粗，分布较密。（如：急粒）强阳性：胞浆中棕黑色颗粒粗大，密布整个胞浆。（如：急粒）骨髓象骨髓增生极度活跃，同一类原始细胞占90%以上，核染色质细致，有核仁。有些细胞胞体略小。其它系列受抑制，数量均减少。实验小结实验结果过氧化物酶阳性：颗粒稍粗，分布较密。急性粒细胞性白血病急性粒细胞性白血病未分化型(M1)原始细胞>90%病例诊断步骤临床症状疑似白血病血常规检查支持白血病骨髓象检查诊断白血病鉴别急性白血病

5、类型实验作业对病例进行诊断，写出诊断流程和依据。思考题如何鉴别急性白血病？