显微镜实用技术培训

《显微镜实用技术培训》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、显微镜实用技术培训Hbchendl学会操作显微镜一、普通光显微镜的调整方法及原理。二、使用CCD相机拍摄显微镜照片。三、荧光样品的观察与拍摄。显微镜的主要组成部分光源聚光镜载物台物镜照相机接口及相机荧光照明组件荧光观察滤光片一、普通光显微镜的调整1.1调整光源1.2调整聚光镜1.3选择物镜1.4对焦观察1.1显微镜光源部件亮度指示光线出射口亮度调整旋纽光源滤光片调整光源的原则需要把灯光调整为亮度适当的白色光。色度控制：1.需要在光路中加蓝色滤光片。2.灯泡电压在9伏附近。电压过高，色彩偏蓝。电压过低，色彩偏黄。色温：

2、评价白色的定量指标高温发光体的色彩与其温度相关。温度高的色彩偏蓝，温度低的偏黄，偏红。白天晴天下阳光的色彩为“纯正的”白色。因此以太阳表面温度6000K为纯正白色的温度。几乎所有的灯光都达不到这个温度，需要用滤光片进行色彩调整，另外通过调整光源电压能对色温进行细致的调整，从而得到纯白色的照明。影像亮度如何控制？使用调整光源电压的方法会影响光源的色彩。正确的方法是用灰度滤光片减光。有ND25与ND6两种，分别能减低亮度至25%与6%。另一个LBD是蓝色滤光片。1.2聚光镜：决定图像清晰程度高档一点的显微镜都是使用柯勒式聚光模式。如果聚光镜调整不

3、正确，图像是调不清晰的。聚光镜系统包括：聚光镜光阑聚光镜视场光阑柯勒式聚焦方法调整载物台高度使样品初步对准焦距。读取物镜指数，调聚光镜光阑数值为物镜指数的80%。将视场光阑调至最小；聚光镜升至最高，然后慢慢向下调，同时在目镜中观察，直到视野中出现视场光阑的影像，并且边缘清晰为止。放大视场光阑，至到光阑边缘扩张出视野。柯勒式聚集调整方法清晰的视场光阑像3.调整使1.按数4.放大使光阑2.缩小光阑清晰字选择像扩出视野1.3调整载物台对焦使用高倍镜时避免压破玻片。使用油镜后必须及时用二甲苯擦净镜头。高倍镜对焦距时，先将载物台升至最高，然后

4、一边观察一边缓降载物台对焦。载玻片上的样品必须盖上盖玻片。所有的镜头光路都是针对有盖玻片的样品设计的。1.4物镜选择高倍镜：分辨率高，视野窄低倍镜：分辨率低，视野大。每次更换物镜后都需要重新调整聚光镜40X/0.75意思是40倍镜，镜头指数0.75二、使用CCD拍摄显微镜图片2.1选择图片参数2.2调整色彩2.3调整亮度2.1电子图片象素：一百万左右象素即可。一般不必更大。画面尺寸在1000X1000左右。保存好TIFF格式的原始图片，不要使用任何软件对原始图片作任何编辑处理。避免使用photoshop修饰图片。可以对图片进行剪裁、

5、调整亮度对比度的操作。可以使用专业图片分析软件上的图片处理功能。2.2图片色彩正确的图片色彩应该反映显微镜下影像的色彩。数码相机具有较强的色彩调整能力，如果调整错误，会导致很大的色彩偏差。影响图片色彩的因素显微镜光源偏色。明显的色彩偏差常来自于显微镜滤光片使用的错误。例如普通照明时在光路中插入了荧光观察使用的滤光片。相机白平衡设置错误。如果是普通的照片，白平衡设置错误导致的色彩偏差并不明显。但在需要进行光度分析的情况下，这种色彩偏差对测量数据的影响就相当大了。调整CCD相机的白平衡调整CCD相机的白平衡保证照片色彩正常的关键在于正确调整相机的白平

6、衡设置。专业CCD相机上有手动白平衡调整。丌明显的偏色对测量影响更大由于人眼的视觉错觉，不易感觉到不太严重的色偏。用对比的方式能观察到照片的细微色偏。人眼对微小的色彩偏差丌敏感白色？目镜上观察到明显的色偏原因一般是滤光片的问题。在普通光照明的情况下，光源光路上必须加LBD蓝色滤光片，否则图像色彩是黄色的。作过荧光观察后，如果使用的滤光片未撒出，在普通光照明下，图像色彩会是红色或绿色。2.3图片亮度控制普通的照片亮度并没有太严格的亮度要求。感觉适当即可。在一些特殊情况下，需要对照片亮度进行细致的控制。明视场图片背景要足够亮暗视场照片容易曝光过度

7、暗视场照片背景要黑，这是通过调整相机黑平衡来达到的。也可以通过调整图片亮度与对比度达到满意的效果。拍摄暗视场的荧光照片可以设置黑平衡，设置黑平衡还能清除背景的杂散荧光通过控制曝光时间来控制亮度曝光控制参数选择图像尺寸：1000X1000左右曝光模式：手动控制相机感光度：ISO200或ISO400曝光时间控制：白色背景位置的灰度值在230左右。在拍摄一批照片的时候，应当尽量应用同样的显微镜设置与相机设置拍摄全部照片。普通数码相机的使用普通数码相机的设计是应用于日常生活的场景。其“傻瓜”式的自动拍摄控制是不适于拍摄色彩单一的显微镜影像的。要使用

8、手动控制曝光。一定要关闭相机的自动白平衡功能（autowhite