牦牛大肠埃希氏菌生物学特性的研究

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1、西藏大学硕士学位论文西藏牦牛大肠埃希氏菌生物学特性的研究姓名：鲁志平申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：曾群辉20090501西藏大学农牧学院硕士学位论文摘要牦牛大肠埃希氏菌病，是严重危害牦牛养殖业的重要疾病，据统计，该病发病率为10.1%，死亡率为2.5%，致死率为45.0%。由于血清型复杂及抗生素的大量使用，耐药菌株不断增加，同时对牦牛肠道正常寄居的菌群造成不良影响，给防制工作及牦牛的健康状况带来了巨大困难和影响。基于此，很有必要对该病病原菌的生物学特性进行研究，找出发病规律及致病机理，为该病的防制打下了良好基础。西藏牦牛大肠埃

2、希氏菌(西藏-9903)，经常规方法培养、形态染色、鞭毛的运动性检查、菌毛电镜观察等，其培养特性和形态特征均与标准大肠埃希氏菌菌种(C83907)相似，符合大肠埃希氏菌特征。经生理生化鉴定，其结果也均符合本菌特性。西藏-9903和C83907对家兔肌肉接种，均具有高致病性，致死率均为100%。分别从致死家兔的肝、脾、肾、肺、心血和淋巴结中分离回收到与接种相同的细菌。以西藏-9903和C83907致死家兔的心血涂片、革兰氏染色，在油镜下观察，可以看出西藏-9903及C83907对血细胞表现为强吸附，每一个血细胞均吸附13个左右的西藏-9903

3、或C83907。通过玻板凝集试验和试管凝集试验，测定出西藏-9903的血清型为O26、O142、O148和O158混合型。通过对西藏-9903菌株和C83907黏附素的测定，红细胞凝集谱测定试验表明，西藏-9903只能9凝集家兔红细胞，血凝谱窄，凝集价为2，C83907能凝集家兔、鸡、鸭、猪红细胞，血凝谱广，凝91188集价分别为2、2、2、2；通过对西藏-9903菌株和C83907进行菌毛小肠上皮细胞刷状缘黏附试验，结果表明，每一个乳兔小肠上皮刷状缘细胞至少能吸附7个菌细胞，二者均能较强或强黏附于刷状缘细胞上。应用兔回肠结扎试验对西藏-9

4、903菌株和C83907的产LT的能力进行检测，发现二者结果均为阳性，说明均具备产生LT的能力，因此，我们用SDS-PAGE法对两者提纯后的LT进一步检测是可靠的，通过SDS-PAGE电泳图谱可看出，二者分子量均为25000Da和12500Da两个区带，分别是LT的A、B两个亚单位的分子量。胞外蛋白酶活性试验及溶血素测定试验，前者西藏-9903菌株和C83907检测结果为阳性，后者测定均无溶血素产生，检测结果均为阴性。选用西藏-9903菌株制备牦牛大肠埃希氏菌多价油佐剂甲醛灭活疫苗，经各项质量检查为合格，进行临床试验，结果表明，该疫苗可诱导

5、家兔、牦牛产生特异性抗体，并具有良好的免疫原性。该疫苗为预防该病奠定了基础。关键词：牦牛大肠埃希氏菌；黏附素；胞外蛋白酶；不耐热肠毒素；抗原性I摘要Abstract，YaksEscherichiacoliistheseriousdamagediseasetothebreedingyak,Accordingtothestatistics,thisdiseaseincidenceratewas10.1%,mortalityratewas2.5%,deathratewas45.0%.Bythecomplexserotypeandantibioti

6、cswereused,drug-resistantstrainsincrease，alsobringtheadverseeffectsforyakintestinalnormalbacterium，tocontrolandyakshealthbringsgreatdifficultiesandinfluence。Basedonthis,itisnecessarytoresearchthebiologicalcharacteristicsofdiseasepathogens,researchthepathogenesisandregulari

7、ty,laidagoodfoundationforthediseaseprevention。Yaks′Escherichiacoli(Tibet–9903),byconventionalculturemethods,morphologicalstaining,flagellumcheckandelectronmicroscopeobservation,theculturecharacteristicsandmorphologicalaresimilartothestandardE.colii(C83907),inlinewiththecha

8、racteristicsofE.coli.Byphysiologicalandbiochemicalidentification,theresultsareinlinewitht