斑马鱼中脑微细结构及相关免疫组化反应

《斑马鱼中脑微细结构及相关免疫组化反应》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、万方数据畜牧与兽医2015年第47卷第12期·89·斑马鱼中脑微细结构及相关免疫组化反应陈微1，章琳俐1，刘仪1，张茜1，杨平1，胡建华2，高诚2，陈秋生h，林金杏2+(1．南京农业大学动物医学院，江苏南京210095；2．上海实验动物研究中心，上海201203)摘要：为深入了解斑马鱼中脑的微细结构，采用光镜技术对斑马鱼中脑结构进行观察研究，并利用免疫组化反应显示脑源性神经营养因子(brain—derivedneurotrophicfactor，BDNF)和CD34的分布特征。选用成年AB型斑马鱼，对其中脑连续切片后进行HE染色。观察辨认中脑神经核团

2、结构，包括有视顶盖、半环枕、被盖、中央层、边缘层、纵枕等十多个核团，并与其他鱼类进行比较。根据试验结果绘制出斑马鱼中脑结构概念图。免疫组化试验观察BDNF和CD34都分布在斑马鱼中脑视顶盖边缘层和中央层交界处。本次结果可为斑马鱼神经生物学模型的建立与应用提供有效的理论基础。关键词：斑马鱼；中脑；结构；BDNF；CD34；免疫组化中图分类号：$917．4文献标志码：A文章编号：0529-5130(2015)12—0089-05目前，斑马鱼作为一种模式动物，缺乏详细的解剖和组织学参考，亟需建立其机体重要组织脏器的形态标准。斑马鱼组织细胞学数据的匮乏，阻滞

3、了斑马鱼作为模式动物的进一步应用⋯。组织学检查能够判断动物主要器官的结构异常和组成变化，其平台和结构模式的建立，对斑马鱼的应用推广有极大促进作用，能提供正常组织的参考。因此，本研究应用光学显微镜对斑马鱼中脑HE染色切片观察，分析中脑各个核团细胞形态特征，并与其他鱼类脑组织核团进行比较，为斑马鱼相关病理毒理学研究提供正常组织形态学参考。脑源性神经营养因子(BDNF)，是神经生长因子家族成员之一。BDNF广泛分布于中枢及外周神经系统，而对BDNF在斑马鱼脑中的分布研究不多。阿尔茨海默氏症呤1的形成与．BDNF的表达量有关，BD—NF蛋白在阿尔茨海默氏症口

4、1中表达有一定的减少。由此可见BDNF在斑马鱼上的研究可为人类医学做补充。CD34阳性造血干细胞在外周血中的分布在近年研究较多【4。5J，而脑部发生缺血性病变时，CD34阳收稿日期：2015—05—13；惨回日期：2015-1l—05基金项目：上海市科委(12140900800，2012-2015)作者简介：陈微(1990一)。女，硕士研究生+通信作者：陈秋生，教授，研究方向为基础兽医学，E-mail：chenqsh305@njau．edu．ca；林金杏。副研究员，研究方向为斑马鱼形态学和质量控制研究，E—mail：linjinxin983@163．

5、com性细胞在脑中的分布与神经再生是否有判6

6、，与神经功能恢复是否有关是亟需研究的。对斑马鱼脑中CD34阳性反应观察研究，为上述研究提供了理论基础。1材料与方法1．1材料AB系斑马鱼取自上海实验动物研究中心，选用性成熟雄鱼共20尾。全鱼长3．37—4．12cm(其中体长2．86～2．74cm)，体质量0．279—0。697g。将斑马鱼放入提前曝氯4d的自来水中，pH值6．9，温度为(25±0．5)℃。1．2主要试剂4％多聚甲醛、苏木素、伊红、梯度酒精、二甲苯、中性树胶；兔抗羊BDNF和鼠抗兔CD34多克隆抗体购于Abeam公司、SABC试剂盒购于武汉

7、博士德公司。1．3光镜样品制备与观察将斑马鱼从第3—4脊椎处切断处死，把头部转移到体视显微镜下进行解剖。将斑马鱼脑保存在4％多聚甲醛中，以备进一步试验。斑马鱼脑置于4％多聚甲醛固定24h后，梯度酒精脱水包埋，进行常规石蜡切片操作，连续切片，切片厚度6斗m，进行相应的HE染色和免疫组化实验，试验方法参照文献[7]的报道，显微镜下观察并摄片。[22]谢丽基，谢芝勋，邓显文，等．鸭I型肝炎病毒和番鸭细小病毒二重荧光定量RT—PCR方法的建立[J]．中国兽医学报，2013，33(8)：1184—1189．[23]XiezX，XieLJ，PangYS，eta1

8、．Developmentofareal—timemultiplexPCRassayfordetectionofviralpathogensofpenaeidshrimp[J]．ArchViml，2008，153：2245—2251．[24]刘好朋，胡京京，唐续，等．Hl亚型猪流感病毒一步法实时荧光定量RT—PCR检测方法的建立及应用[J]．中国畜牧兽医，2014，11(41)：63—67．万方数据·90·AnimalHusbandry&VeterinaryMedicine2015V01．47No．122结果2．1中脑显微结构斑马鱼中脑结构见图1。中脑

9、包括视顶盖、半环枕和被盖。视顶盖位于中脑最背侧，从外到内由边缘层(SM)、中央层(SC)和小球周灰质带(PG