人(Human)血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1)-NEWA

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1、本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断分离。人（Human）血管内皮细胞粘附分子1（VCAM-1/CD106）2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。ELISA检测试剂盒3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。使用说明书4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟检测原理取上清。试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于先包被血管内皮细胞粘附分子1（VCAM-1/CD106）抗体

2、的包被微孔中，-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。自备物品用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的1.酶标仪（450nm）作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮细胞粘2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL附分子1（VCAM-1/CD106）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测3.37℃恒温箱定吸光度（OD值），计算样品浓度。操作注意事项样品收集

3、、处理及保存方法1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地后再使用。2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。冲液加19份的蒸馏水。3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明洗板方法书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1m

4、in后甩尽4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。5.所有液体组分使用前充分摇匀。2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。试剂盒组成操作步骤名称96孔配置48孔配置备注1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无袋密封放回4℃。标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；检测抗体-HRP10mL5mL无20×

5、洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无加。终止液6mL3mL无封板膜2张2张无4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶说明书1份1份无自封袋1个1个无（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480ng/mL锅或恒温箱温育60min。试剂的准备5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去20×洗涤

6、缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。试剂盒性能6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的0.9900。OD值。2.灵敏度：最低检测浓度小于1.0ng/mL。结果判断3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应4.重复性：板内、板间变异系数均小

7、于15%。OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。本浓度值。6.有效期：6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。FORRESEARCHUSEONLY.freeze-thawcyclesNOTFORUSEINDIAGNOSTICPROCEDURES.Plasma-CollectplasmausingEDTAorheparinasanan

8、ticoagulant.Centrifugesamplesfor30minutesat3000×gat2-8℃within30minutesofcollection.StoreHumanVascuolarcelladhesionmolecule1(VCAM-1)samples