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1、年第!期∀总第#期∃酿酒科技分光光度法%一测定淀粉酶活力王福荣陈敏&!∋(!)∗天津轻工业学院∀天津市火沽南路号邮编。+一摘要本文介绍一种测定%一淀粉酶活力的新方法原理是途粉酶在一定条件下与沈粉作用,由分光光度计在特定时间检测反应液与腆呈色,查表即得%一淀扮薛活力。该表是由计算机对大量实验数据进行曲线拟合,并用擂值、、,−。处理后获得的,具有简便快速精密度高的优点差异系数为&肠%一关幼词淀粉酶醉活力分析分光光度法−#标准比色液∀贝+7#.8一∋&∃前盲−液化型淀粉酶∀%一.一葡准糖一.一葡聚−仪器,,,:%一%一。,2−糖水解酶俗称淀粉酶%/01∃9型分光光度−−−−−‘
2、−(国际分类号为34!5该酶厂泛分恒温水浴布于动植物及微生物巾,工业6卜则多以细−!;7孔<4=>?计算机菌、霉菌等微生物发酵法生产。在药织、食!−试验方法品、酒精等工业中被广泛应用−!−比色波长灼选补%一淀粉酶活力测定方表5稀腆液与标准比色液吸光度法甚多(检测酶反应液的物,、入∗/Κ..&.∋理性能如粘度流动性等∀∃卢∃#∋&Μ&&:8&8.&⋯88&8∋&−−叫’−。−−·>Λ#Λ#·,∗标准色∀∃#Λ∋&∃&9&&#&Κ)..&/”(#““∀如日本≅;Α标准法ΒΧΔ∀∀∀∀&.)。!∀几0∀稀碘液∃%&∋()∋!∗+∋∋,−∋∋∗∋#./#&.&#口#1
3、#2###,∗2Ε一)2(⋯,Α55ΧΦ改良法等∃检测酶反应液与碘呈色性能)2ϑ,/稀碘液与反应液呈色稳定性∃.#℃&∀如ΓΗ5Ι/ΔΗ法国际表%一,4,1·谷物淀粉酶测定标准放置时间∃3‘&567‘∋⋯18一/#/8./一9#,∀∀∀∀∀英国国家标准等∃以及采%#/7##/(8#/8,#/98#//(#∀//##∀/#8#。178#∀1(用特殊底物∀如普施安黄色,一一:一一,一,,淀粉9硝基;麦芽四糖许9硝共取稀碘液与标准比色液以水为空白,,苯麦芋庚糖普等&<):=>4>)4比色皿(/1型分光光度计测定吸光专用仪器∃如旧,?%1,。淀粉粘焙力测定仪一8#型动力学分度结果见表Η,,,析仪离子
4、分析仪≅ΑΒ6%ΑΧ等&还报道采用,,43作为比色波长时稀碘液吸,。一,,∀有液相色讲高压液相色拼等方沙巨&内现光变很低即木底很小而标冲Ι色可达#/−(∀Κ‘Δ行测定方法不&尸百碘呈色,‘,标准色刊立。直至习ϑ呈高测定灵敏度。∀致即为终点该方法缺点是呈色反应与标准./稀碘液与反应液呈色稳定性,,。,,色不一致并用目视比色误差较大木取!3!反应浪置入83!稀碘液中用,,,,研究采用分光光度计代替目视比色并对大水为空白!>3比色皿,,#43比色结果见∀量数据经计算机处理得到晦活力与吸光度表/对照表,使测定方法简侧、快速、精密度反应液与稀碘液的呈色稳定性随时间延。,局。长而色泽变浅因此反应液与稀
5、碘液皇色1∀试荆后应立即比色。一∀∀11/肠可溶性淀粉∃见5<89,一7#&..稀碘液与反应液显色温度的影响∀∀1/ΕΦ,∋89,一7#,,缓冲溶液∃见5<&取同一畴液定时取!3!反应液置入8∀,.一、、Γ原碘浓∃见5<89,7#&41!稀碘液中显色温度分别为1(Χ1−Χ∀、’、“,。19稀碘液∃见5<89,一7#&/1Χ/,Χ7#Χ结果见图!∀∀∀∀,∀,∀,∀,,,∀,,分析化验一酿酒科技年第Ν期∀总第#一期∃,其误(作为逼近函数差为,Π,ΘΡΧΧ一)、、、各二Ο∀∃一Α∀∃⋯⋯/,粼(并记误差向量为、(、(、·各Σ乃。各乙乙二?∀一∃−(使#∀Π∃满足’·一’‘Ν1一“卜
6、Α∀,一‘∀一,Τ(息禽〔〕‘∗Α一一‘一∀,∀,一一一急〔〕一Π匕二⋯‘上土5∀/Χ∗、Α∀∃任中∃,,,!,!+令.,&&−.,!&∃#&&舀&8乃ΥΘ即逼近函数Α∀Π∃与实际函数的误差平方和,图显色温度影响为最小以保证所得逼近函数即曲线多项式,,。从图5可以看出同一酶液由于显色最准确,−、,温度不同达到与标准色一致∀>Σ。!。。∃实验是在中二ΝΞ%∗Τ飞Π⋯⋯Π吟∗簇!&。,,时所需反应时间不同显色温度高反应时中进行实验数据拟合得到#条拟合曲间缩,−。短测得酶活力偏高但在&℃左右则线,−−−影响较小故显色温度以&℃为宜∀>∃0Σ!.∋9!一&##8.Π−一−&8#9Ρ
7、&5ΠΖ!.计算机拟合Ψ−!−.−∀7∃0二一!−∋&9Ψ.&∋#.Π实验点的选取−−−!!一∋!88.∋Π[&一5ΠΖ!8!!#取不同浓度的酶液按节操作进行测9一,,Π&一5Π,−&#∋一ΖΠ‘定选取#条终点在Ν/Χ∗左右的曲线这些Ψ#Π&−−,−8/Χ∗&。988!#Ρ;Υ一,Π‘曲线在时的吸光度在!#ς9∋之间一!−−9−与型分光光度计最佳测量区域一致然∀4∃0Σ.#.∋
