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《香草醛对酪氨酸酶活性的抑制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、华南理工大学学报(自然科学版)第34卷第5期JournalofSouthChinaUniversityofTechnologyVo.l34No.52006年5月(NaturalScienceEdition)May2006文章编号:1000-565X(2006)05-0053-05*香草醛对酪氨酸酶活性的抑制龚盛昭杨卓如程江(华南理工大学化工与能源学院,广东广州510640)摘要:在25,pH=6.8的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲体系中,采用酶动力学方法研究了香草醛对酪氨酸酶单
2、酚酶和二酚酶活性的抑制效应.实验结果表明:香草醛对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)约分别为2.7和4.1mmol/L;香草醛能明显延长单酚酶的迟滞时间,4mmol/L香草醛能使迟滞时间由1.1min延长至3min;Lineweaver-Burk图显示香草醛对二酚酶的抑制作用表现为混合性抑制,对游离酶的抑制常数和对酶-底物络合物的抑制常数分别为3.48和15.1mmol/L.关键词:香草醛;酪氨酸酶;活性;抑制作用;酶动力学;单酚酶;二酚酶中图分类号:Q356.1
3、文献标识码:A酶在医药、食品、轻工、化工和环保等领域应用[1]广泛.酪氨酸酶(EC114181)又称多酚氧化酶,广泛存在于动植物体和人体内,是生物体合成黑[2]色素的关键酶.酪氨酸酶是一种含铜的金属酶,每一个亚基含两个金属铜离子,两个铜离子分别与蛋白质分子中组氨酸结合,另有一个内源桥基将两个铜离子联系在一起,构成酪氨酸酶催化氧化反应活性中心,能够催化单酚羟化成二酚(单酚酶活图1酪氨酸酶催化反应模型[4][3]性),并把二酚氧化成醌(二酚酶活性),醌在非酶Fig.1Modelo
4、ftyrosinasecatalyzingreaction促条件下形成最终的反应产物黑色素.在催化反应M单酚化合物;D二酚化合物;Q醌类化合物;过程中,酪氨酸酶的存在形式有三种:还原型(Emet)K-1~K8反应常数[5]氧化型(Eoxy)和脱氧型(Edeoxy).Emet,Eoxy型酶具有二素瘤等,而且还用作害虫调控剂和食品添加剂,酚氧化酶活性,而只有Eoxy才具有单酚酶活性,只有在医药、化妆品、食品工业和农业等领域有着广阔的[2][4]Edeoxy才能结合氧分子.酪氨酸酶催化反应模型应
5、用前景.近年来,酪氨酸酶抑制剂的研究非常活[2,6-7]如图1所示.跃,Kubo等人从天然植物中提取了系列的酪酪氨酸酶抑制剂通过抑制酪氨酸酶活性从而抑氨酸酶抑制剂,并测定了它们对蘑菇酪氨酸酶的抑制黑色素生成,可用来预防和治疗色素沉着和黑色制作用,提出了相应的动力学模型,并根据研究成果[8]进行了酪氨酸酶抑制剂的分子设计.Nerya等人从土耳其植物Licorice的根中分离出了系列含有酚羟基的黄酮类化合物,并测定了这些化合物对酪氨收稿日期:2005-06-17[4,9-11]酸酶的抑制作用.厦
6、门大学的陈清西等人测定*基金项目:广东省自然科学基金资助项目(011563,了苯甲酸、对-氰基苯酚、熊果苷和苯甲醛族化合物04020114)等物质对酪氨酸酶的抑制作用.作者简介:龚盛昭(1970-),男,在职博士生,广东轻工职业技术学院副教授,主要从事精细化学品的开发和应用研香草醛,又称为香兰素,化学名为4-羟基-3-甲究.E-mai:lshengzhao2002@yahoo.com.cn氧基苯甲醛.本文以香草醛作为效应物,研究其对酪54华南理工大学学报(自然科学版)第34卷氨酸酶活性的影响及抑
7、制作用机理,提出香草醛和UiA1-A0UR=100%=100%酶分子间结合作用的分子模型,以期为酪氨酸酶抑U0A2-A0制剂的分子设计和抑制剂的实际应用提供理论依式中:A1是指含有底物、酪氨酸酶、香草醛的测活体据,为新型高效酪氨酸酶抑制剂的开发提供新的系的吸光度;A2是指含有底物、酪氨酸酶,但不含香途径.草醛的测活体系的吸光度;A0是指含有底物,但不含酪氨酸酶和香草醛的测活体系的吸光度.1实验2结果与讨论1.1材料和仪器酪氨酸酶为Sigma化学公司的蘑菇酪氨酸酶,2.1香草醛对酪氨酸酶
8、单酚酶活性的影响比活性为55.344mol/(skg)(3320U/mg).3,4-二迟滞效应是酪氨酸酶催化氧化酪氨酸的典型特羟基苯氨酸(L-DOPA)、L-酪氨酸也是Sigma化学公征.迟滞时间的长短取决于反应溶液中酶和底物的司产品.香草醛、二甲亚砜(DMSO)、磷酸氢二钠和浓度,其能够通过加入过渡金属离子或者二酚而被[12]磷酸二氢钠均为国产分析纯.使用的蒸馏水为去离缩短甚至消除,也可以因为加入了一些环庚三[13]子重蒸水.烯酚酮等抑制剂而延长.图2为不同浓度香草醛仪器为60
