水产动物病原检测技术的发展现状

《水产动物病原检测技术的发展现状》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、综述水产动物病原检测技术的发展现状王艺红(漳州市水产技术推广站)水产业自20世纪50年代起就1。1聚合酶链反应(PCR)技定，根据副溶血弧菌特异基因序开始从捕捞业向养殖业的转变，水术列，设计引物，进行PCR检测，产养殖业是农业经济的主要支柱产聚合酶链反应(Polymerase是现阶段检测副溶血弧菌的最快速业。随着养殖规模的不断扩大，水ChainReaction，PCR)，又称无细准确的方法；Lee等采用了PCR技产养殖病害的发生日益频繁，危害胞克隆技术(FreeBacteriaCloning术对创伤弧菌进行鉴定；Jon~ik也越来越严重，是制约整个水产

2、养Technique)，是一种根据生物体内Chun等利用16S～23SrRNA基因殖业发展的最重要的因素之一，做DNA复制的某些特点而设计的，间区序列(16S～23Sintergenic好病害的预防工作是养殖业的重中在体外对特定DNA序列进行快速spacerregions，IGSs)的保守性，之重。为了对各种暴发病、流行病扩增的技术。待检病原具有某一特建立了鉴定拟态弧菌的PCR技术；进行深入研究和监控，将现代生物定基因片段时，即可利用特异性的Arakawa等1990年等应用PCR技技术应用于各种病原诊断和防治，引物对样品中微量的目标DNA进术检测了虹鳟

3、鱼传染性造血器官坏建立灵敏、准确、快速的病原检测行PCR扩增，增加靶DNA数量，死病毒(InfectiousHaematopoietic技术已迫在眉睫。使其达到足够的检测量，通过电泳NecrosisVirus，IHNV)，并以生物常规水产病害检测技术主要包检测扩增出的特定片断，即可确定素标记的寡核苷酸探针鉴定了产物括目捡、镜检、解剖检查、病原的感染的病原。的特异性；祝瑕琳等选择针对溶藻分离鉴定等方法。当前，用于捡测PCR检测技术具有灵敏性高、弧菌和副溶血弧菌的胶原酶基因，哈水产动物病毒、细菌性病害的现代特异性强、可靠迅速等特点，在水维氏弧菌的部分Tox

4、R基因的特异生物学技术发展迅速，主要包括分产养殖动物处于带菌状态或大规模性，优化设计了3对特异性引物，建子生物学、免疫学、细胞培养方法爆发细菌性疾病之前能进行快速、立了一种检测大黄鱼致病性弧菌的等三大方面，这些技术发展迅速，准确的检测，这是传统方法无法比多重pCR检测方法。且在原有基础上根据实际的需求产拟的。目前国内外已建立了不少用同时，在病原菌检测的实际工生出很多相应的衍生技术，已被广PCR技术检测水产病原菌的方法：作中进行了大量的改进下，开发出泛应用于多种水产动物病毒性、细邓先余等建立了副溶血性弧菌免疫PCR(Immuno-PCR)、套式菌性、寄生

5、虫等病害的诊断，在水16S～23SrDNA基因间区序列引物PCR(NestedprimerPCR)、产动物病害诊断中并发挥着巨大的(16S～23Sintergenicspacerre—反转录PCR(Reversetranscription作用。gions，IGSs)的PCR技术；Maki—PCR)、实时荧光PCR(Realtimeno等已经完成副溶血弧菌的基因组fluorescenPCR)等新类型的PCR1核酸检测技术在水产病测序，从而使副溶血弧菌毒力基因技术，克服常规PCR技术存在一害诊断中的应用及特异的基因序列得到进一步确定的假阳性、灵敏度低等缺点

6、。49综述1．2核酸杂交技术测法对IHHNV进行检测。通过斑由于细菌种间16SrRNA基因核酸杂交技术已成为多种水产点杂交可进行大批量的样品检测，序列间隔区在长度、序列上具有相动物疾病的常规诊断方法。按杂交操作简便、安全，易于推广，并且对多变性，所以利用保守区基因作的方式可分为斑点杂交、Southern灵敏度比单纯的PCR法或斑点杂为引物，对间隔区进行克隆和分转移杂交、原位杂交等，根据酸分交法有进一步的提高。析，就能为病原微生物的各菌株、子探针的来源和性质可分为基因组另外，原位PCR检测方法也种、属的鉴定、分型提供依据。该DNA探针、cDNA探针、RN

7、A探已用于多种水产动物病毒的检测，检测技术目前已被成功的运用到了针及人工合成的寡聚合苷酸探针原位PCR是指在细胞或细胞切片病原菌的种、属以及家族种类的鉴等。核酸杂交检测方法已经在多种上对待测的低拷贝数基因进行扩定中，彭宣宪等2000年采用细菌病原检测中应用：Deering等1991增，并通过原位杂交进行检测。这16SrRNA基因保守区特异性引物，年研制了生物素标记的反意义探针种方法不仅能够检测出病原菌的存建立了鉴定嗜水气单胞菌、鲁克氏检测染性造血器官坏死病毒(IH—在，且能够将其在组织细胞中定耶尔森菌、鳗弧菌、柱状曲挠杆NV)，该探针特异性好，只能与I

8、—位，因而具有其他PCR方法所不菌、乙型链球菌、荧光假单胞菌等HNV反应并且可以识别所有的I—