Hepa1-6细胞的培养及小鼠皮下移植瘤模型的建立

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1、第26卷第4期实验动物科学Vo1．26No．42009年8月LB0RAT0RYANIMALSCIENCEAugust2009Hepal一6细胞的培养及小鼠皮下移植瘤模型的建立张志灯曹治云(1．福建出入境检验检疫局技术中心，福州350003)(2．福建中医学院中西医结合研究院临床研究所，福州350003)摘要：目的培养小鼠Hepal一6细胞，建立小鼠皮下肝癌模型，为后续实验奠定基础。方法Hepa!一6体外培养，观察细胞生长情况，按2×10，鼠(A组)、2×106／鼠(B组)和4×10／鼠(C组)的细胞量，接种于C57BL／6小鼠，观察肿瘤生长情况。结果细胞生长速度较慢，传代第3

2、d为指数生长期；成瘤率分别为A组30％，B组为80％，C组为100％；A、B组分别在接种肿瘤细胞后12d和10d成瘤，而C组在接种肿瘤细胞后7d成瘤，成瘤速度明显高于前两组；第3周和第4周C组和B组肿瘤生长体积显著高于A组(P<0．01)，而C组和B组之间无明显差异。结论使用Hepa1．6细胞以4×10，鼠的细胞用量在SPF级雌性C57BL／6j小鼠前肢部皮下成功建立了肝癌移植瘤，完成了小鼠肝癌动物模型的建立。关键词：I-Iepa1．6；移植瘤；模型中图分类号：Q95．331文献标识码：A文章编号：1006—6179(2009)04．0001—03肝癌发病率高，临床预后差，严

3、重影响着人类的养基购自InvitrogenCorporation公司，胎牛血清(FBS)健康，肝癌围手术期治疗的情况将影响着肝癌复发购自德国Biochrom公司，胰蛋白酶购自Sigma公司。率、复发时间、生存质量、生存期。因此，建立一个类自制双抗(含青霉素、链霉素)。细胞培养箱CB150似人肝癌的动物模型，对于研究肝癌的围手术期的德国Binder公司。治疗机理及临床治疗方法有重要的意义。小鼠肝癌1．2细胞培养动物模型是进行肝癌实验研究的重要材料和手段。取液氮保存之Hepal一6细胞株，37℃水浴复温，自20世纪初获得小鼠自发性肝癌模型以来，人们借Hepa1．6细胞置含5％CO

4、，37℃的培养箱中培养，培助这种肝癌动物模型对肝癌的研究不断的取得新的养基为含10％FBS的DMEM高糖培养基，每2d换液进展。一次，显微镜下观察当细胞长满瓶底时，用本文将源自C57BL／6i小鼠BW7756肝癌细胞株0．025mlML胰蛋白酶消化，消化时间以镜下观察为的Hepa1．6细胞进行培养，并接种于同源的C57BL／准，当多数细胞形态变圆时，应即用含10％胎牛血6i小鼠的皮下，成功建立了皮下移植瘤模型，为后续清的DMEM液终止消化。低速离心后，吹打细胞制成治疗肝癌药物研究奠定了基础。细胞悬液，按1：2～1：3传代。待培养细胞总量达到实验需求、细胞处于对数生长期时进行消

5、化，血球计1材料和方法数板进行计数，制成相应浓度的细胞悬液。同期观察细胞形态，进行细胞计数，并绘制细胞生长曲线。1．1实验动物及试剂1．3皮下移植Hepal一6细胞购自中国科学院上海生命科学院4周龄SPF级雌性C57BL／6i30只，随机分为3细胞资源中心。C57BL／6j小鼠购自上海实验动物中组，每组l0只。将浓缩为3个浓度梯度：1×106／mL、心，4周龄，体重(17±2)g，雌性。实验条件符合SPF1×10／mL和2×107／mL的细胞悬液，按0．2mL／鼠的要求，所用物品均经高压灭菌消毒。高糖DMEM培量分别接种于4周龄SPF级雌性C57BL／6i小鼠前收稿日期：20

6、08．09．11资金项目：福建中医学院校管课题(x2o06017)，陈可冀基金资助项目(CKJ2008037zyx200813)作者简介：张志灯(1978一)，男，中级兽医师。E-mail：zhidengzhang@163．corn·2·实验动物科学26卷肢部皮下，每个细胞浓度梯度接种10只小鼠，接种细胞数目分别为2×10／鼠(A组)、2×10。／鼠(B组)和4×10／鼠(C组)。接种Hepal一6细胞后，观察每个浓度梯度的小鼠皮下肿瘤生长情况，了解每个细胞梯度浓度组的皮下肿瘤形成率。接种肿瘤细胞14d后，每日应用游标卡尺测量肿瘤的最大直径a及横径b(单位为毫米mm)，按公式

7、V=ab／6计算肿瘤体积。1．4统计学处理数据采用SPSS12．0forwindows软件包，应用单因素图3消化后72h方差分析检验法对相同时期的3组小鼠的肿瘤体积进行统计学处理。8070602结果50磐40最302．1细胞培养20Hepa1．6细胞附壁生长，呈不规则的多形性。细10l胞生长缓慢，可重叠堆积生长，但难于铺满整个瓶O5791113底，需进行消化后方可铺满。培养96h～120h，可细胞生长天数(d)，图4进行1I2～1：3的细胞传代。此细胞对EDTA敏感，Hepal-6细胞生长曲线在含有ED