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1、第38卷第6期西安建筑科技大学学报(自然科学版)Vol.38No.62006年12月JXianUniv.ofArch.&Tech.(NaturalScienceEdition)Dec.2006石油高效降解菌的筛选及其降解特性黄廷林,宁亚平,柴蓓蓓(西安建筑科技大学环境与市政工程学院,陕西西安710055)摘要:从石油污染土壤中筛选、分离得到三株高效石油降解菌GX1、GX2、GX3,初步鉴定分别为假单胞菌属(Pseudomonassp.)、邻单胞菌属(Plesionmonassp.)和动
2、胶菌属(Zoogloeasp.).同时还研究了pH值、营养物质、油质量浓度对菌体生长和降油率的影响.结果表明,这三株菌在初始pH值为7-9对石油的降解率分别为867%,729%,647%;最佳氮源为NH4NO3,氮磷比大约控制在41左右时,降解效果较好.在原油初始浓度较低时,降解率随石油浓度的升高而略有提高.不同菌株耐油程度不同.关键词:石油污染;降解菌;筛选*中图分类号:TE9913文献标识码:A文章编号:10067930(2006)06079505.西北黄土地
3、区的石油开发利用都存在一定程度的石油泄漏和排放,造成环境的石油污染,使原本脆弱的自然环境更加恶化.石油污染环境的生物修复方法其经济高效、操作简单、无二次污染等特点而受[13][4]到高度关注.含油土层的自然净化过程由于受生物量及环境因素的限制,往往非常缓慢.向污染土壤中投加环境适应性强、降解效能高的菌种或菌群是提高石油类污染物降解效率的重要手段.要获得高[5]效的生物修复效果,就要对石油的生物降解条件进行研究和探讨.本试验以石油污染土壤为菌源,以原油为惟一碳源,进行驯化后,反复筛选、分离得到高
4、效降解石油的优势菌,对其进行鉴定;并对影响其降解性能的营养和环境条件进行试验研究,以期为西北黄土地区石油污染环境的生物修复提供科学依据和参考.1材料与方法1.1试验土样及油样石油污染土样取自陕北长庆油田的采油井周围.土样经碎散、除杂、过筛(1.25mm)、混均、密封储存在试料袋中,以备试验使用.试验所用油样为长庆油田的原油,将原油用石油醚(30-60!沸程)溶解,然后在65∀5!水浴上蒸出石油醚,并在65∀5!恒温干燥箱赶尽残余石油醚后即得标准油样品,放入干燥器内备用.1.2培养基[6]富
5、集培养基(富集培养基一般使用牛肉膏蛋白胨培养基):牛肉膏5g,蛋白胨10g,NaCl5g,蒸馏水1000mL,pH7.2-7.4,若配制固体培养基需另加入20g琼脂.[7]降油培养基:NH4NO32g,K2HPO41.5g,KH2PO43g,MgSO4#7H2O0.1g,无水CaCl2001g,Na2EDTA#2H2O0.01g,蒸馏水1000mL和石油,pH值为7.5.分离培养基:降油培养基1000mL,原油0.6g,琼脂20g.1.3菌悬液的制备将37!下生长24h的斜面菌种无菌操作接种
6、到装有100mL富集培养基的250mL三角瓶中,在30!、160r/min的恒温摇床中好氧振荡培养24h,然后将种子液离心、用磷酸盐缓冲液反复洗涤,最后配制成一定浓度的菌悬液备用.*收稿日期:20060924修改稿日期:20061118基金项目:国家自然科学基金资助项目(50378077);国家教育部高等学校优秀青年教师教学科研奖励计划项目作者简介:黄廷林(1962),男,山东昌邑人,教授,博士生导师.主要研究方向:水资源保护与水质控制,水处理技术,水环境修复.796西
7、安建筑科技大学学报(自然科学版)第38卷1.4菌体生长量测定使用VIS7220可见分光光度计,460nm波长测定培养液的光密度(OD),表征菌体生长量.1.5石油含量测定石油含量的测定采用非分散红外吸收法.1.6石油降解菌的培养、筛选和鉴定将所保存的污染土样添加到装有降油培养基的三角瓶中,在30!,200r/min的恒温摇床上进行振荡培养8d,移取一定量的富集培养液接入新鲜降油培养基中,在相同条件下培养8d,共重复三次.经过3个周期的驯化后,在无菌的条件
8、下,用接种环蘸取驯化培养液,在分离培养基的平板上划线后,平板倒置于恒温培养箱中培养24h,然后将典型菌落在分离培养基的平板上反复划线纯化后得到单一菌落,再将纯化的菌株接种至斜面培养基上培养后,4!保存于冰箱中.菌株的鉴定依据∃一般细菌常用鉴[8]定方法%进行,初步鉴定到属.1.7影响石油降解因素试验以降油培养基为基础,分别改变pH值、石油浓度、N源及N、P元素的添加比例等因素,在30!,200r/min的恒温摇床上进行振荡培养,连续培养一定时间以后,取样观察,检测并分析其细菌生长量及石油烃含量
