马铃薯的脱毒培养快繁

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1、第十二章马铃薯的脱毒与快繁水培法与雾培法马铃薯是一种全球性的重要经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物，也是一种调节市场供应的重要蔬菜。马铃薯退化问题严重，叶片卷缩，降低产量，影响品质。病毒侵染是马铃薯退化的根源，高温是诱发病毒病的环境条件。危害马铃薯的病毒有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。由于马铃薯是无性繁殖作物，病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯病毒可使块茎产量减少50%~80%。马铃薯茎尖组织培养—生产无病毒苗—提供优良种薯

2、。一、马铃薯的脱毒与快繁（一）茎尖培养与脱毒1.茎尖培养脱毒程序（1）取材：芽长到15cm时，将顶端切下6-8cm，去掉下面2片叶，在切口处涂上生根生长调节剂后，把切条植入一口径为10cm、内装消毒营养土的花盆中，后用玻璃烧杯罩上，保持10d。马铃薯的脱毒试管苗再将其转入生长箱中，每天光照16h，光照强度3000-4000lx。2周后去掉顶芽，以促进腋芽的生长。当腋芽长到1-2cm时，折下腋生枝，用于消毒、接种。（2）消毒：水洗干净，无菌条件下先用70%的酒精浸组织15-20s，再用2%次氯酸钠溶液浸泡4-5min，然

3、后用无菌水冲洗3次。（3）接种：把芽置于解剖镜下，左手用一把镊子将芽按住，右手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，当形似一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来后，用锋利的长颈刀片将分生组织切下来，上面可带/也可不带叶原基，再用刀片将其接种到培养基上。（4）培养基：MS培养基（提高NH4+、K+浓度，利于茎尖成活）。加入调节物质6-BA0.5mg/L，NAA0.1-1.0mg/L。培养条件：温度25±2℃，光照16h/d当新梢长至2-3cm时，转至生根培养基（MS培养基中加入0.3mg/L的NAA）（5）病毒鉴定（指示植物法）

4、：马铃薯的病毒指示植物：苋科的千日红、藜科的杖藜、茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。从被检植株上取下叶片，置于等容积的缓冲液（0.1mol/L的磷酸钠）中，研成匀浆。在指示植物的叶片上撒少许600号的金刚砂。然后将被检植物的叶汁液涂于其上，并稍加摩擦，以使指示植物叶表面细胞受到侵染，但又不要损伤叶片。约5min后，用水轻轻洗去接种叶片上的残余汁液。一周后如果表现病毒病症状，则说明被检再生植物脱毒失败。2、影响脱毒效果的因素（1）外植体大小：0.2-0.3mm，带1-2个原基为好（2）茎尖所处部位：块茎脐部休眠芽的生长点、块茎顶

5、部的粗壮芽、植株主茎的生长点（3）病毒种类及复合感染（脱毒更困难）PSTV（条纹病毒）、PVS（S病毒）、PVX（X病毒）、PVM（M病毒）、PAMV（丛矮病毒）、PVY（Y病毒）、PVA（A病毒）、PVRV（卷叶病毒）3、无毒材料的保存将无毒原种种在温室或防虫罩内灭过菌的土壤里，以防蚜虫传毒或机械传毒大规模繁殖时，种植在田间隔离区内春播早留种和夏播留种经过茎尖脱毒处理的无病毒植株，再通过离体培养进行繁殖与保存（二）微型薯生产技术1、试管生产（1）单茎节扩大繁殖：由无性繁殖的试管苗中获得茎切段（每个茎段带1-2个叶片或

6、腋芽），每个三角瓶里接4-5个茎段，进行培养。（1）单茎节扩大繁殖：培养条件：22℃，16h补充光照1000lx常用培养基：MS+3%蔗糖+琼脂；MS+2%蔗糖；MS+CCC50mg/L+6-BA6.0mol/L+0.8%琼脂，或MS+50-100mol/L香豆素；MS+3%蔗糖+4%甘露醇+0.8%琼脂。当小植株4-5cm时，进行第二步培养。（2）微型薯诱导：要求：有一定量的植物生长物质，暗培养培养基：MS+50-100mg/L香豆素的液体或固体培养基2、微型薯温室多层架盘工厂化生产4-6层架进行培养，育苗盘规格60

7、cm×25cm×4-6cm，育苗基质为蛭石或马粪。三角瓶繁殖的脱毒苗以单茎节或双茎节扦插，在人工调控的温度、光照下，经过60-90d即可收获。微型薯直接定植试管苗和剪尖扦插法3、底畦栽植脱毒苗生产小薯或微型薯备畦：长方形，深33cm、宽1.2m，挖出的土堆放在距畦33cm处的东西两边和北端，铺施30-50kg厩肥/m2，深翻20cm，翻匀耙平、浇足底水，以备来年春季栽苗。土壤消毒及栽苗：播种前半月，畦内喷800倍乐果灭蚜，封盖塑料膜，播种时可揭膜移栽，南北向，行距40cm，株距10-15cm双株，密度40-60株/m2

8、。将地膜重新覆盖或将孔土封严，在畦上搭架，封盖另一层塑料拱棚薄膜，栽后20d除去地膜培土，将架上的地膜换成45-50目的防虫纱网，上面再盖薄膜，气温升到10度左右，除去膜，留纱网到收获。需水时从上面喷或自一端开口进行沟灌。4、微型种薯的扩大繁殖采用试管、温室、底畦生产的微型薯原原种，可进一步通过塑料大棚或大田在春秋两季扩大繁殖，以