药品的无菌检查技术

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1、药品的无菌检查技术授课人:汪穗福(高级讲师)苏惠虹(助理讲师)广州市医药中专学校2005年3月教学目标1、学会直接接种法无菌检查的操作。2、懂得无菌检查供试品溶液的制备。3、熟知无菌检查的结果判断。4、学习薄膜无菌检查法的使用。5、掌握影响无菌检验的因素和解决办法。教学重点：直接接种法无菌检查的操作。教学难点：薄膜无菌检查法的使用。第五节直接接种检查技术药品无菌检查法的具体操作方法可分为直接接种法和薄膜过滤法。《中国药典》（2005年版）指出：如供试品性状允许，应优先采用薄膜过滤法。进行供试品无菌检查时，所采用的检查方法和检验条件

2、应与验证的方法相同。直接接种法即每支（或瓶）供试品按规定量分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中，除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10％，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于10ml。培养基的用量和高度同方法验证；每种培养基接种的管数同供试品的检验数量。由于直接接种法具有操作简便等优点，特别适宜无抑菌和防腐作用药品的无菌检查。据统计，《中国药典》（2005年版(二部)共有57种单列品种（占39.3％）采用该法规定。操作时，用

3、适当的消毒液对供试品容器表面或外包装采用浸没或擦试的方法彻底消毒。如果容器内有一定的真空度，可用适宜的无菌器材（如带有除菌过滤器的针头），向供试品容器内导入无菌空气，再按无菌操作启开容器取出内容物。无论使用何种检查法，其检查操作过程均包括供试品的处理及接种与培养及观察两大步骤。除另有规定外，供试品处理按照样品的不同用以下方法处理与接种。1．混悬液等非澄清水溶液供试品该类供试品操作最简单，取规定量的供试品直接无菌操作接种至各管培养基中。2．固体制剂供试品取规定量的供试试品，无菌操作直接接种至各管培养基中；或供试品中加入适宜的溶剂溶解

4、，或按标签说明复溶后，取规定量无菌操作接种至各管培养基中。3．β-内酰胺类或磺胺类供试品取规定量供试品，混合，加入适量的无菌β-内酰胺酶溶液或对氨基苯甲酸溶液使中和，接种至各管培养基中，或直接接入含β-内酰胺酶或对氨基苯甲酸的各管培养基中。4．非水溶性供试品取规定量供试品，混合，加入适量的聚山梨酯80或其它适宜的乳化剂及稀释剂使其乳化，接种至各管培养基中。或直接接种至含聚山梨酯80或其它适宜乳化剂的各管培养基中。一、供试品的处理及接种5．敷料供试品取规定数量，每个包装以无菌操作拆开，于不同部位剪取约100mg或１cm×3cm的供试

5、品；接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。6．肠线、缝合线等供试品肠线、缝合线及其它一次性的医用材料按规定量取最小包装，无菌拆开包装，接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。7．灭菌医用器具供试品取规定量，必要时应将其拆散或切成小碎块，接种于各管足以侵没供试品的适量培养基中。8．放射性药品取供试品1瓶（支），接种于装量为7．5ml的硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基中。每管接种量为0．2ml。接种阴性对照与此同时另取1支硫乙醇酸盐培养基管，加入上述同一容器内的供试品稀释液或0.9％灭菌氯化钠溶液1ml，作阴性对照。（作阴性对照

6、的目的是说明未接检品前的培养基和供试品稀释液及无菌检查操作都是无菌生长的，而供试品阳性检出的菌确是来自检品。）[如供试品液未经验证试验，可同步进行，方法见第五节的直接接种法的验证试验]。接种阳性对照根据GMP和《中国药典》要求，接种阳性对照应在阳性对照室中进行，以防交叉污染。接种时应按验证试验的结果选择阳性对照菌。方法是：在相应的培养基中接入小于100个cfu的阳性对照菌（菌液的制备和同培养基灵敏度检查菌液的制备相同）。供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量（见表6－2、表6－3）相同。阳性对照管培养48~72h应生长良

7、好。二、培养及观察培养基按规定的温度培养14d逐日观察并记录浑浊新鲜培养基或划线斜面培养基培养液涂片，染色，镜检判断是否有菌三、结果判断供试品符合规定培养基管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长供试品不符合规定培养基管中任何1管显浑浊并确证有菌生长除非能充分证明生长的微生物非供试品所含。当满足下列至少一个条件时，判试验结果无效：⑴对无菌检查试验相关设施的微生物监控数据表明其不符合规定。⑵对无菌试验过程的回顾，揭示了本操作程序是错误的。⑶阴性对照管有菌生长。⑷供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证微生物生长是因无菌试验中所使用的物品和（

8、或）无菌操作技术不当引起的。试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。直接接种法图示无抗菌作用的供试品抽样接种于培养基硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基管培养每天观