《动物细胞工程》课件

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1、2.2动物细胞工程细胞工程的基本技术植物细胞工程动物细胞工程植物组织培养技术植物体细胞杂交技术动物细胞核移植技术动物细胞融合技术单克隆抗体技术动物细胞培养技术(基础)从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。一、动物细胞培养1、动物细胞培养的概念动物细胞培养技术动物细胞培养技术思考1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？2、为什么动物细胞培养过程需将组织分散成单个细胞？3、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？4、如何理解原

2、代培养和传代培养？5、传代培养的细胞能一直传代下去吗？为什么？6、动物细胞培养需满足哪些条件？7、动物细胞培养有哪些应用？动物细胞培养过程1、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。2.将组织细胞分散成单个细胞将组织块剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，这样组织就会分三成单个细胞。思考：为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？①单个细胞容易和周围环境进行物质交换——获得营养物质、氧气等，排出代谢废物；②分散成单个细胞培养能使细胞水平操作的其他技术得以实现

3、。1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？P44旁栏用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。不能用胃蛋白代替因为两者的最适pH不同，动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（最适pH2.0）没有活性，而胰蛋白酶(最适pH7.2-8.4)的活性较高。胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？P44寻根问底胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。动物组织单

4、个细胞细胞悬液贴壁生长分瓶培养10代细胞50代细胞不死细胞原代培养传代培养胰蛋白酶剪碎加培养液接触抑制少数癌变少数3.配制细胞悬液，进行原代培养及传代培养1、细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。2、细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养4.如何界定原代培养和传代培养？随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖⑴原代培养:将动物组

5、织消化后的初次培养。⑵传代培养:对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。传代培养动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶（分解弹性纤维）10代细胞原代培养50代细胞细胞株无限传代细胞系遗传物质未改变遗传物质改变动物细胞培养过程多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？P46讨论充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。）适宜温度、PH

6、和气体环境；无菌无毒环境4、动物细胞培养的条件（抗生素，更换培养液）①无菌、无毒②营养：与体内基本相同③温度和PH④气体环境（95%空气+5%CO2）（36.5±0.5℃，7.2-7.4）（合成培养基）1、大规模的生产生物制品。2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。3、检测判断物质的毒性。4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于等，为及其他疾病提供理论依据。5.动物细胞培养应用：筛选抗癌药物治疗和预防癌症植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细

7、胞的全能性细胞增殖培养基性质固体培养基液体培养基培养基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖动物血清培养结果植物体细胞培养目的快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白二.动物细胞核移植技术和克隆动物将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。分类胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易；细胞分化程度高，恢复全能性不容易1.动物细胞核移植概念：（难度高）(二)、体细胞核移植的过程：请看教材P48图2-21思考

8、：1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细胞作为受体细胞有什么好处？2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？MⅡ中期卵母细胞诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体现全能性的物质。电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎卵母细胞采集、培养MⅡ期卵母细胞供体牛供体细胞注入去核卵母细胞代孕母牛