甜叶菊糖甙的提取纯化及分离检测方法研究

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1、甜叶菊(Steviarebaudiana)糖甙的提取纯化及分离检测方法的研究滕祥金摘要:随着人民生活水平的提高，现在吃得更营养，吃得更健康逐渐成为消费者关心的重点。甜叶菊糖甙的生产不但能补充我国食糖的不足，更可替代糖精等不利于人体的化学合成甜味剂，因此，低热量的甜味剂甜叶菊糖营也随之热起来，长期食用甜叶菊糖普不会使人发胖，特别适宜肥胖病、糖尿病、高血压、动脉硬化、龋齿病患者使用，而且物理、化学性能稳定、无发酵性。本论文以本实验室栽种甜叶菊叶片为原料，研究并探讨了甜叶菊糖甙的提取、纯化、分离、检测的方

2、法。蒸煮浸提法的最佳条件:以水为溶剂、温度100℃、时间6h、料液比1:10，浸提物中甜叶菊糖甙含量为9.28%。甜叶菊糖甙的提纯通过比较选择了沉淀效果比较好的FeSO4；和Ca(0H)2，加入条件为80℃恒温水浴40min，静止4h抽滤，在通过大孔吸附树脂和阴阳离子交换吸附精制甜叶菊糖甙，冷冻干燥后得到甜叶菊糖甙结晶粉末。甜叶菊糖甙组分的分离方法主要有重结晶法、层析法。重结晶法利用甜叶菊糖甙各主要组分在乙醇溶液中溶解度的不同进行结晶将主要组分分离;层析法是利用甜叶菊糖甙主要组分在装有硅胶的层析柱中

3、被吸附和解吸速度的不同将甜叶菊糖普主要组分分离。检测甜叶菊糖甙含量的主要方法有重量测定法、液相色谱法、薄板层析法、分光光度法(蒽酮为显色剂)、分光光度法(DNS试剂为显色剂)、化学发光法等。采用硅胶G薄板层析法，展开体系:正丁醇:乙酸:乙醚:水(9:6:3:l)，能十分清晰将甜叶菊糖甙、葡萄糖、麦芽糖分开，可以定性检测甜叶菊糖甙的两种主要单体组分。分光光度法(蒽酮为显色剂)和分光光度法(DNs试剂为显色剂)都可以测定甜叶菊糖甙的主要组分，方法简便，对实验设备要求不高，但准确度不高、误差大。流动注射化

4、学发光法测定甜叶菊糖甙是我们最近研究出来的一种新的测定方法，能够准确测定出甜叶菊糖甙的含量，与其他测定甜叶菊糖甙的测定方法相比，其准确度、灵敏度都很高，这一测定方法在国内外尚属空白。具有一定的理论意义和实际应用价值。关键词:甜叶菊糖甙；提取；纯化；测定1前言1.1研究的目的与意义甜叶菊原产于巴拉圭的Amambay及Mbaxacayu山脉，土壤条件是古代水成岩及火成岩的风化土壤。呈现出明显的局部特异性土壤分布，多含沙壤土和腐殖质土，肥力较差。气候条件因地势及地形的原因，降雨量较多，温差较大，且有霜降现

5、象，可认为近似温带气候，整个生长期温度都在20℃以上。甜叶菊具有喜温性，种子萌发的最适温度为20一25℃，营养生长期温度也要求22℃以上，开花的最适温度为18一22℃。甜叶菊属感光性强的短日照植物，临界夜长大于12h。长日照反应期分别在现蕾前13一14d和开花前26~30d，此阶段为花芽形成诱导期。此时期需具备少于12h的短日照才能正常开花，所以短日照是甜叶菊由营养生长转到生殖生长的关键(鲍志华，1999)。甜叶菊作为糖料植物，早在第二次世界大战时就曾引起过国际重视。1970年日本从巴西引进甜叶菊，

6、开始驯化、栽培、制昔，同时进行毒理、食品检测等试验，并首先开发利用甜叶菊产品一甜叶菊糖甙。我国于1976年从日本引种试种，并获成功。目前除中国、日本引种和推广外，韩国、泰国、菲律宾等也有不同程度的推广栽培(T宁等2004，杨丹等2005)。我国自1976年开始由南京中山植物园、中国农业科学院等科研单位先后从日本引进甜叶菊试种成功。80年代初向全国各地推广种植，生产的甜叶菊干叶主要出口日本。1982年成都化学制药厂科技人员首次研制甜叶菊糖甙生产技术成功，紧接着，天津南开大学、北京商业机械化研究所分别在

7、江苏镇江和湖南西湖农场兴建甜叶菊厂试产成功。1985年卫生部批准甜叶菊糖甙在饮料、糕点和糖果中使用，而且用量不受限制，1996年我国甜叶菊糖甙产销量突破千吨大关(唐志发，1999)，1997年产销量达到1400吨左右，其中80%左右为出口，我国现已成为世界上最大的甜叶菊糖甙生产国和出口国。我国的甜叶菊糖甙发展之所以如此迅速，与其生产原料充足密切相关。甜叶菊适应性强，我国自海南到新疆，从云南到黑龙江，除高寒和无灌溉条件的地区外，均可种植，南方每年收成2一3次北方每年一收。事实证明，发展甜菊糖对我国国民

8、经济发展有着重要的意义。甜叶菊糖营是由甜叶菊的叶片提取，是一种天然无热量高倍甜味剂，它在体内不参加代谢、不蓄积、无毒性，其安全性已得到国际FAO和WHO等国际组织的认可，2004年7月6日世界联合卫生组织正式通过允许甜叶菊糖甙在世界范围内通用的决议，这为甜叶菊糖甙的安全性提出了有利的证明。因此，甜叶菊是一种安全的天然甜味剂。我国卫生部自1985年和1990年分别批准甜叶菊糖甙为不限量使用的天然甜味剂和医药用甜味剂辅料，用其制成的食品饮料，长期食用不会使人发胖，特别适宜