DB22T 1830-2013 饮料中4-甲基咪唑的测定 高效液相色谱法

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1、ICS67.050X04DB22吉林省地方标准DB22/T1830—2013饮料中4-甲基咪唑的测定高效液相色谱法Determinationof4-methylimidazoleindrinks-HPLC-performanceliquidchromatography2013-05-15发布2013-09-01实施吉林省质量技术监督局发布DB22/T1830—2013前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林大学提出。本标准由吉林省卫生厅归口。本标准起草单位：吉林大学。本标准主要起草人：郭娜、孙春

2、燕、时晓磊、张妍、王菲、赵星辰、李文莉。IDB22/T1830—2013饮料中4-甲基咪唑的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饮料中4-甲基咪唑的高效液相色谱测定方法。本标准适用于碳酸饮料、果蔬汁饮料、功能饮料、茶类饮料和乳饮料中4-甲基咪唑的高效液相色谱测定方法。本方法检出限为0.3mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理饮料中4-甲基咪唑经碳酸钠溶液净化

3、，三氯甲烷-无水乙醇溶液提取，反相C18柱分离，高效液相色谱仪测定，保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1碳酸钠。（Na2CO3，497-19-8）4.2庚烷磺酸钠。（C7H16NaO3S，22767-50-6）4.3磷酸二氢钾。（KH2PO4，7778-77-0）4.4无水硫酸钠：使用前650℃灼烧4h4.5甲醇：色谱纯。4.6三氯甲烷：色谱纯。4.7无水乙醇。4.8磷酸。4.9三氯甲烷-无水乙醇溶液（80v：20v)：移取80mL的三氯甲烷及20mL的无水乙醇混合均匀备用。碳酸

4、钠溶液（100g/L)：准确称取碳酸钠100g（精确到0.1g）于锥形瓶中，溶解后转移到1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。1DB22/T1830—20134.100.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液：准确称取磷酸二氢钾6.8g、庚烷磺酸钠1g于1000mL容量瓶中，加水900mL，用磷酸调节pH至3.5，用水定容至1000mL。4.114-甲基咪唑标准品：纯度≥99%4.124-甲基咪唑标准储备溶液：准确称取1.0g4-甲基咪唑于1000mL的容量瓶中，用水定容至刻度。4-甲基咪唑含量1000mg/L，作为储备溶液。4℃条件下保存（有效期半年）。4.1

5、3-甲基咪唑标准工作溶液：准确吸取4-甲基咪唑储备溶液1.00mL、2.00mL、10.00mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，浓度分别为10mg/L、20mg/L、100mg/L。4℃条件下保存（有效期半年）。4.14无水硫酸钠柱：直径2cm，长15cm，底部用脱脂棉塞住，上部放入10cm高的无水硫酸钠。4.15滤膜：0.22µm，水系。5仪器5.1高效液相色谱仪，带紫外检测器。5.2旋转蒸发器。5.3涡旋混合器。5.4电子天平：感量为0.1mg和0.1g。5.5超声波仪。6分析步骤6.1样品处理碳酸饮料需超声脱气30min。移取5mL样品于12

6、5mL分液漏斗中，加100g/L碳酸钠溶液（4.9）5mL和三氯甲烷-无水乙醇（4.8）溶液20mL，剧烈振摇5min。静置分层后，将下层有机相移入另一分液漏斗中，重复上述操作二次，合并有机相，每次用100g/L碳酸钠溶液（4.9）10mL洗涤有机相，共3次。然后将有机相通过无水硫酸钠柱（4.15）滤入旋转蒸发瓶中，50℃浓缩至近干，以流动相溶解残渣并定容至5mL，经0.22µm微孔膜过滤后供HPLC分析。6.2空白试验除不移取试样外，均按6.1进行。6.3测定6.3.1色谱参考条件色谱参考条件如下：a)色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，3.5μ

7、m）或其它等效色谱柱。2DB22/T1830—2013b)流动相：甲醇（4.4）:0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（5v:95v）。c)波长：210nm。d)流速：1.0mL/min。e)进样量：20uL6.3.2定性分析保留时间定性。标准溶液的色谱图见附录A。6.3.3定量分析根据标准曲线得回归方程，通过该方程计算得到样品含量。在上述色谱条件下，4-甲基咪唑的参考保留时间为25min，外标法定量。7结果计算与表达按式（1）计算试样中4-甲基咪唑的含量：c´V´1000X=.....................................(1)

8、m´1000式中：X——试样中4-甲基咪唑的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）