RNA干扰调控细胞黑色素形成机制的研究

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1、北京科技大学硕士学位论文摘要探寻人类肤色的变化的奥秘，寻求治疗由肤色差异而产生的皮肤癌等各种疾病已成为近些年来科学家们关注的焦点课题。本研究利用最为前沿的mqA干扰技术对可能影响肤色变化或形成的基因进行了调控研究。首先对决定肤色的主要因素黑色素的产生过程，及在黑色素合成过程中相关基因间的作用和分子机制进行了概述。接着简要叙述了常用两种黑色素的抑制剂的结构和作用原理，又对砌qA干扰技术的发展过程、分子机制、应用领域等方面做了详细阐述。本研究的目的是探讨RN^干扰技术抑制恶性黑素瘤细胞株A375的MClR、MITF基因表达后，对细胞色素影响及可能的形成机制，并对鼢4A干扰技术和化学合成物对黑色素的

2、抑制效果作了全方位的比较，确定RNA干扰的特异性、优越性。利用RT-PCR检测MCIR、MITF、TYR、TYRP．1基因mRNA水平的变化，利用测定黑色素含量检测蛋白水平的改变。用台盼蓝活细胞计数法检测其对细胞增殖的影响。通过RT-PCR检测MclR、MITF、TYR、TRP-1基因通过siRNA]f'F用显著下调，黑色素含量明显降低，脂质体包裹的S识N^对^375细胞的毒性远果苷等化学小于熊合成药物。利用siRNA对细胞色素进行调控，有效的抑制了黑色素的生成，明确了黑色素形成通路的关键基因之问的的相互关系，进一步证实了黑色素的形成机制，与传统的调控黑色素的方法相比，具有用量小、抑制效率高、

3、细胞毒性低等优点。通过siRNAJ周控黑色素的合成的研究再次证明，RNA干扰技术以其准确、高效、特异等优点，向传统色素调控方法提出挑战，将作为一种快速、有效的分析、确定细胞基因功能的强大工具，为寻找人类肤色和毛色不同的真正原因提供更加有力的支持，也为预防、治疗皮肤癌等色素障碍性疾病开辟了新途径。关键词：RNA小分子干扰，黑色素，黑素皮质素受体1基因，小眼球相关转录因子基因，酪氨酸酶北京科技大学硕士学位论文RNAinterferencemechanismfortheformationofmelanocytescontrolAbstractExplorethemysteriesofhumancol

4、orchanges．Seektreatmentfromvariationsinthecolorofskin(3atnoDrandotherdiseaseshavebecomethefocusofattentioninrecentyears,scientiststopic．TheuseofthemostadvancedRNAitechnologytochangecolorOrshapemayaffecttheregulationofthegene．Firstdecideonthecolorofthemainfactorsintheselectionprocessmelanoma．inthepro

5、cessofmelaninsynthesisandtheroleofgenesandmolecularmechanisms．Asummatyofthecommonlyusedtwoinhibitorsofthestructureandroleofmelanintheory．Also011thedevelopmentofRNAinterference．process,：molecularmechanisms,andothera“潞havedoneadetailedexplanation．Theeffectandpossibleformationmechanismofcv岫咖careinvesti

6、gatebyRNAinterferencemethodthatinhi'bitsmelanocortin·1-receptorgene(MClR、andMicrophthalmla-associ衄tedtranscriptionfactor似Ⅱ叼expressioninhumanmalignantmelanomacelllineA375，RNAinterferencetechnology,andalsothedampeningeffectsofchemicalcompoundsmadeallofthemelanoma,RNAinterferencetodeterminethespecifici

7、tyofsuperiority．ThechangeinMClR岍，TYltandTYI冲-1mRNAlevelisdetectedbyreverseUaus甜ptasepolymerasechainreaction(RT-PCR)．nechangeofproteinlevelisdetectedbymeasuringmelanincontent．Theeffectforcellproliferat