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《鱼类鲜度K值的简易测定方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第11卷第2期青岛大学学报VOL.11NO.21998年6月JOURNALOFQINGDAOUNIVERSITYJun.1998X鱼类鲜度K值的简易测定方法刘海燕王海青高华刘坤朱明(青岛大学化学系,青岛266071)(青岛大学医学院,青岛266021)摘要本文采用阴离子交换树脂柱对鱼肉中ATP系列化合物进行吸附和分离,然后分别测定不同洗脱液的吸光度来计算K值,从而建立了鱼类鲜度K值的简易测定法.该法简便、快速,回收率为94.3%-104.8%,相对标准偏差为2.72%-3.46%.关键词:鱼类鲜度;K值;离子交换层析引言长期以来,世界上多数国家都将总挥发性盐
2、基氮(TVB-N)的含量作为对鱼类鲜度[1]评定的重要化学指标.目前我国对水产品鲜度评价的化学指标采用的也是TVB-N但研究证明,TVB-N不能反映出鱼类死亡后的早期鲜度.因鱼死亡早期,其自身的酶活性[2]仍在活动,鱼的早期鲜度取决于自身的生物化学反应.Saito等提出将肌苷和次黄嘌岭之和对ATP各级降鲜产物之和的比值即K值作为评定鱼类鲜度的重要化学指标,该法受到了世人的瞩目.现已证明测定K值对鱼类鲜度进行评定是行之有效的,尤其在评定鱼类死亡后的早期鲜度方面较TVB-N法更为优越,因此许多研究者建议将K值作为[3,4]评定鱼类鲜度的指标.由于判定鲜度的方法要
3、求迅速、简便,有必要对传统的K值测定方法加以改进.为此,本文研究了K值的柱层析简易测定法.1实验部分1.1仪器与试剂752C紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂);电动离心机(上海手术器械厂);层析柱(自制);717强碱型阴离子交换树脂(16-50目);ATP、ADP、AMP、IMP、HxR、Hx标准品;高氯酸(PCA)、三氯乙酸(TCA),丙酮,氢氧化钠,氢氧化钾,盐酸,氨水,氯化钠等皆为分析纯.1.2样品的制备取鱼肉粉碎,准确称取1g置于10ml离心试管中,加入冰冷的10%PCA2ml,用玻璃棒搅拌,离心,取上清液.沉淀部分再用冰冷的5%PCA处理2次
4、.合并三次上清液,用10mol/LKOH和1mol/LKOH中和至pH为6.5,沉淀部分离心除去,用冰水洗涤沉X收稿日期:1997-08-24第2期鱼类鲜度K值的简易测定方法51淀,最后用10ml容量瓶定容后放入-20℃的冷冻室内保存待用.1.3树脂的处理取717强碱型阴离子交换树脂100g,放入1L的烧杯中,用300ml丙酮搅拌浸泡,滤去丙酮,用去离子水洗净,加入600ml1mol/LNaOH,搅拌浸泡,滤去碱液,反复水洗至呈中性,加入1mol/L的HCl溶液600ml搅拌浸泡,滤去酸液,多次水洗至呈中性,最后一次连水一起灌入瓶内放入冰箱内冷藏备用.1.4
5、柱子的制备树脂柱采用0.8×18cm玻璃柱,底部用玻璃纤维垫底,柱内装入树脂高度约8cm,灌注时避免有气泡产生,若有气泡混入,可在柱内加入去离子水,再用很细的玻棒搅拌除去气泡.1.5上柱操作取2ml鱼肉提取液或0.1-0.5ml浓度为10mmol/L的标准样品溶液,置于50ml烧杯中,用0.5mol/L的氨水调节pH值至9.4,使之通过层析柱,再在烧杯中用0.5mol/L氨水将少量去离子水调节pH值至9.4,同样使之通过层析柱.当样品液下降至树脂上1cm左右时,加入40ml去离子水,去离子水流完后,在柱下放上50ml容量瓶,用量筒取0.001mol/LHCl
6、溶液(A液)45ml,加一部分到柱中,然后接上分液漏斗加入剩下的A液.待A液流完后换上另一另50ml容量瓶,同上操作,加入0.6mol/LNaCl-0.01mol/LHCl溶液(B液)45ml.等A、B液都洗脱完后,将两容量瓶中的溶液分别用A液、B液定容到50ml,用紫外可见分光光度计在250nm处分别测定其吸光度,按下式计算K值.A250nm(A)K=×100%A250nm(A)+A250nm(B)2结果与讨论2.1测定原理鱼类的肌肉运动必须依靠ATP(三磷酸腺苷)转化提供能量,而鱼死后其体内所含ATP按下列途径分解:ATP→ADP(二磷酸腺苷)→AMP(
7、一磷酸腺苷)→IMP(肌苷酸)[5,6]→HxR(肌苷)→Hx(次黄嘌呤).因此判断鲜度的指标K值可由下式计算:K=HxR+Ax×100%,由此可见K值是HxR和Hx在ATP全ATP+ADP+AMP+IMP+HxR+Hx部分解产物中所占的百分比.K值越小,鲜度越好.本方法首先用离子交换树脂处理鱼肉提取液,ATP系列化合物被树脂吸附,然后用近中性的A液将不带磷酸基的HxR和Hx洗脱,接着在酸性条件下,增加盐的浓度将ATP、ADP、AMP、IMP核苷酸类洗脱,分别测其吸光度,即可计算K值.2.2蛋白质固化剂的选择在样品制备时蛋白质固化选用了TCA和PCA进行试验
8、,发现TCA在紫外区有强烈吸收,在波长250nm下将
