《液相色谱质谱联用》PPT课件

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1、概述LC-MS联用机遇与挑战LC：适用面广，但定性能力差。MS：定性能力强，但分析混合物时效果差。LC-MS通过LC的分离，使MS可以分析具有大量杂质的混合物中的待测物，并提高分析的专一性和灵敏度；LC可以分离同分异构体，弥补了MS的不足。GC-MS:样品必须气化不适合极性、热不稳定和大分子化合物。（20%）LC-MS：不挥发性化合物、极性化合物、热不稳定化合物和大分子化合物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等)，分析范围广。HPLCMS高压液相操作质量范围无限制常使用无机盐缓冲液高真空测定质量取决于m/z和质谱类型需要采用挥发性盐LC/MS联用的主要困

2、难LC-MS接口(Interface)类型API(atmospherepressureionization)ESI(electrosprayionization)APCI(atmosphericchemicalionization)热喷雾(TSP)、等离子体喷雾(PSP)、粒子束(LINC)和动态快原子轰击(FAB)等。LC-MS各种联用技术的比较技术流速/mL.min-1样品类型适用的分子量范围/u热喷雾(TSP)1～2极性水溶物如药物、代谢物<1,000等离子体喷　雾(PSP)0.5～2极性小于TSP分析的样品<1,000粒子束(LINC)0

3、.2～1非极性物质，如农药、脂肪酸<1,000大气压化学电　离(APCI)0.2～2低极性物质，如农药、偶氮染料、药物<1,000动态快原子轰　击(FAB)0.001～0.01极性物质，如肽类<10,000电喷雾(ESI)0.001～1肽类、蛋白质、寡核苷酸、糖类、药物等<200,000Electrosprayionization(ESI)ESI将溶液中的离子转变为气相离子,进行MS分析，最软的质谱离子化技术。Tayler锥(电泳机制）2~4kV0.1mm2cm1、液体表面带电2、带电雾滴形成3、雾滴蒸发4、气相离子从微小的雾滴产生LC-MS中常

4、用电离技术不同表面张力溶剂的起始电位（c＝0.1mm,d=40mm)溶剂／(N/m)Uon(kV)溶剂／(N/m)Uon(kV)CH3OHCH3CN0.02260.0302.22.5(CH3)2SOH2O0.0430.0733.04.0ESI所需电位为使Taylor发生静电喷雾，在毛细管尖端需施加的起始电位：溶剂表面张力Taylor锥的半角0真空介电常数c毛细管半径ESI实验条件优化１、待测物质在溶液中的状态（溶液化学）待测物质在供试品溶液中以离子状态存在，可提高生成气相离子的效率，提高检测灵敏度。B+RCOOHBH++RCOO-HA+

5、NH3A-+NH4+2、溶剂的表面张力纯水，因表面张力高，所需起始电位Uon高，易产生放电现象；常用水－甲醇（50:50)溶剂，同时黏度也下降，有利于雾化．3、溶液流速低流速产生细雾滴，有利于产生气相离子，提高信号灵敏度；高流速范围内，为提高雾化效率，需采用高速同轴气流辅助雾化技术。4、雾滴的蒸发速率提高雾滴蒸发速率的方法：采用挥发性溶剂；提高“干燥气”温度和流速；使用加热金属毛细管。5、气相离子的产生竞争机制——表面活性高（最低溶剂化能）的离子优先转移至雾滴表面，最终转变为气相离子，故有较高的实验灵敏度。1、应采用表面活性低的缓冲剂2、采用低浓度的

6、挥发性酸、碱及缓冲盐3、用高纯度的溶剂、试剂4、样品应作预处理，除去干扰物及盐。Atmosphericchemicalionization(APCI)样品溶液借助雾化气的作用，喷入高温（如500℃）蒸发器中，此时溶剂和溶质均为蒸气，由63Ni放射源或放电电极产生低能电子使试剂气，如N2、O2、H2O、或溶剂B等离子化，经复杂的一系列反应使溶质产生正或负离子。N2+e-N2++2e-A+BH+AH++B(质子转移）A+B+A++B(电荷转移）Ｍ＋Na+,M+NH4+、M+Ac-、M+Cl-等。APCI：适用于小分子极性较低的化合物（醇、醚等）。ESI：

7、热不稳定或难于气化的极性化合物。ESI和APCI共同点:1、使用高电压元件和雾化气喷雾法产生离子2、通常产生(M+H)+或(M-H)-等准分子离子3、产生极少的碎片，但可以控制产生结构碎片４、非常灵敏的电离技术。不同点:1、生成离子的方式不同，ESI：液相离子化；APCI：气相离子化2、样品兼容性ESI：极性化合物和生物大分子,多电荷离子。APCI：非极性，小分子化合物（相对ESI而言）且有一定挥发性，要产生的是单电荷离子。基体辅助激光解吸电离(MALDI)1988年，Hilenkamp和Tanaka发明，可将热不稳定分子完整地携带进入气相的离

8、子化技术．操作过程：样品与基质（1:100-50,000)均匀混合，点在样品靶子上，空气干燥，送入离子源。基