《细菌学检验概论》PPT课件

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1、临床细菌学检验概述IntroductiononClinicandDiagnosticBacteriology江苏大学医学院检验学系病原生物学教研室周天戟教授9/14/20211本章内容第一节标本的采集和处理原则第二节细菌的形态学检查第三节细菌的分离培养和鉴定第四节细菌的非培养检测方法9/14/20212第一节标本的采集和处理原则一、标本采集的一般原则1．早期采集2．无菌操作3．根据目的菌的特性用不同的方法采集4．采集量适当5．注意生物安全9/14/20213第一节标本的采集和处理原则二、标本的处理1.对环境敏感的细菌

2、如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检2.其他各种标本采集后最好在2h之内送到实验室3.若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存4.一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h9/14/20214５.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全防护６.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出７.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送８.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送9/14/20215药物

3、敏感试验标本直接涂片镜检分离培养形态学试验生化试验免疫学试验动物试验明确诊断初步诊断免疫学试验分子生物学技术其他检测技术细菌感染的检验程序辅助诊断9/14/20216第二节细菌的形态学检查1.镜检可以了解有无细菌及大致的菌量2.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊断和治疗疾病有一定的参考意义3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的初步识别和分类，用于细菌鉴定细菌形态学检查的意义9/14/20217不染色标本的检查：初步观察、细菌动力单染色法：细菌形态复染色法：细菌形态、结构与鉴别革兰染色法（Gramsta

4、in）抗酸染色法（acid-faststain）特殊染色法：负染色、鞭毛染色细菌的形态学检查法9/14/20218一、不染色标本1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况2.常用的方法有压滴法和悬滴法有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌，制动试验阳性，可初步推断为“疑似O1群霍乱弧菌”。9/14/20219二、染色标本（

5、一）常用染料1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等2．酸性染料：有伊红、刚果红等3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料有荧光标记的抗体9/14/202110（二）常用的染色方法1．革兰染色（gramstain）方法：1、结晶紫初染1min2、卢戈氏碘液媒染1min3、95％酒精脱色30sec～1min4、稀释石炭酸复红复染1min原理：G+等电点低，带正电荷的碱性燃料作色牢固G+细胞壁肽聚糖层多，G-细胞壁脂质含量高G+含有较多核糖核酸镁盐，与结晶紫、碘

6、结合成大分子复合物意义：鉴定细菌与致病性有关选择抗菌药物参考革兰阴性杆菌革兰阳性球菌9/14/202111（二）常用的染色方法2．抗酸染色（acid-faststain）方法：1、石炭酸复红初染加热3~5min，水洗2、3%~5%盐酸酒精脱色30s，水洗3、碱性美蓝复染30s，水洗。原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合成牢固的复合物，能抵抗脱色意义：可将细菌分为两大类：-抗酸性细菌-非抗酸性细菌9/14/202112（二）常用的染色方法3．荧光染色（1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易

7、观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。（2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。4.鞭毛染色：可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。5.异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色。9/14/202113（二）常用的染色方法6.芽胞染色：7.墨汁染色:一般用于新型隐球菌检查9/14/202114第三节细菌的分离培养和鉴定选择培养基接种选择培养方法选择可疑菌落选择鉴定方法9/14/202115细菌的分离培养和鉴定一、培养基的种类和选择培养基的

8、组成成分、培养基种类、培养基的选择二、分离及培养细菌的分离、细菌培养方法三、生化反应和鉴定碳水化合物的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验碳源和氮源利用试验9/14/202116一、培养基的种类和选择培养基（culturemedium）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。9/14/202117(一)培养基的组成成分1．营