《细菌检查与防治》PPT课件

《《细菌检查与防治》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、课程名称：医学微生物学教学内容：细菌感染的检查方法及防治原则学时：学时教学目的：掌握临床细菌标本的采集、送检原则,革兰染色法的步骤熟悉病原菌的检验程序、常用血清学试验的原理了解细菌学检查在临床诊断中的重要性教学方法：理　　论教学重点、难点、关键：病原菌的检验程序细菌学诊断(bacteriologicaldiagnosis)示踪性检测形态学检查分离培养生化试验血清学鉴定致病力和药敏测定动物实验毒力检测药物敏感试验病原微生物感染的检查法临床细菌标本的采集、送检原则1.无菌操作:避免人为污染2.选准部位

2、:根据疾病种类和病程不同,采集不同标本(specimens)如:伤寒第一周取血第二、三周取大、小便、骨髓3.早期取材(1)疾病早期(2)使用抗菌药物之前,如已用抗生素,应停用1—2天(3)机体免疫因素形成之前(4)未出现合并或继发感染之前4.快速送检:大多数细菌低温送检,但奈瑟球菌须30--40℃保温送检标本采集的准确性是检查结果可靠性的保证1、直接涂片镜检形态与染色性具有特征的病原菌可直接染色镜检，根据典型形态、排列、染色性做初步诊断(一)、病原菌分离鉴定的一般程序：一、形态学检查(1)不染色标

3、本的检查主要用于观察病原菌的某些形态特点及运动性٭常用的方法有压滴法和悬滴法如:用压滴法观察霍乱弧菌的“鱼群样运动”暗视野检查用于检查活菌、螺旋体及其动力(2)染色标本的检查染色单染复染正染负染(negativestaining)革兰染色法抗酸染色法荧光染色单染色:只用一种染料进行染色.可分为:正染:标本着色,背景不着色负染:标本不着色,背景着色用于形态的观察,不能鉴别染色性复染色:用两种或两种以上的染料进行染色目前常用的有:革兰染色法、抗酸染色法、荧光染色、特殊染色法既可观察形态结构,又可鉴别染

4、色性革兰染色法步骤:制片:涂片染色:结晶紫初染1分钟水冲洗碘液媒染1分钟水冲洗95%乙醇脱色30秒左右水冲洗稀释复红复染30秒水冲洗干后油镜下观察干燥固定涂片干燥固定染色镜检结果:染成紫色称革兰染色阳性G+染成红色称革兰染色阴性G-原理:(1)等电点学说结晶紫为碱性染料(2)化学学说G+含有核糖核酸镁盐,能与结晶紫形成牢固的复合物(3)通透性学说G+G-PI2～34～6核糖核酸镁盐+-通透性小大脂质少多意义:(1)鉴别细菌(2)指导临床用药(3)了解细菌的致病性二、分离培养→纯培养：根据不同标本采

5、取不同培养基。分离化脓性球菌如链球菌、肺炎球菌可采用血平板；分离脑膜炎球菌可采用巧克力平板菌落形态观察:大小、表面、透明度、边缘、高度、色素、溶血等三、生化反应：通过检测细菌代谢产物的生化反应鉴定细菌的种类乳糖发酵试验、甲基红试验、硫化氢试验等。四、血清学鉴定:(serologicalidentification)：用已知抗体检测标本中分离得到的病原菌的血清型别，采用玻片凝集法。原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递

6、减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。纸片扩散法（Kirby-Bauer法）五、药敏试验：抑菌圈或抑菌环纸片扩散法原理：聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时加入100μl浓度为105CFU/ml的菌液，盖上盖板，35℃16～20h观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，通过CLSI标准判断其敏感和耐药。再取0.0

7、1ml容量接种环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代培养，经35℃过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死99.9％原始种入的细菌即为该菌的最低杀菌浓度(MBC)。微量液体稀释法(microdilutiontest)用微量加样器接种100μl到96孔中，盖上盖板。同时作阳性、阴性对照。手工看浊度或仪器自动判读。按照CLSI标准报告细菌对某抗菌药物为敏感、耐药和中介。原理：E试条是一条5mm×50mm无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长稀释抗菌药物，另一面有读数和判别的刻

8、度。抗菌药物的梯度可覆盖有20个MIC对倍稀释浓度的宽度范围。将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度，对照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。E-TEST孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC)。六、细菌成分的检测(detectionofbacterialantigens)：目前应用最为广泛的是细菌抗原的检测如:协同凝集试验、间