1.当归多糖调控Wnt2fβ-catenin信号通路与延缓造血干2f祖细胞衰老机理的分析；2.当归多糖对衰老模型大鼠骨髓造血功能的影响与机理分析

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称中文全称4-HNE4-Hydroxynonenal4-羟壬烯醛8-OHDG8-hydroxy-deoxyguanosine8-羟基脱氧鸟苷ASPAngelicaSinensispolysaccharide当归多糖AGEsadvancedglycationendproducts晚期糖基化终末产物DKK-1Dickkopf-1DKK-1D-galD-galactoseD-半乳糖GAPDHglyceradehydephosphatedehydrogenase磷酸甘油醛脱氢酶HRPhorseradishperoxidase辣根过氧

2、化物酶MACSmagnetic-activatedcellsorting免疫磁珠分选NACN-Acetyl-L-cysteineN-乙酰半胱氨酸PVDFpoly(vinylidenefluoride)聚偏二氟乙烯ROSreactiveoxygenstress活性氧SA-β-Galsenescence-associatedβ-galactosidase衰老相关β-半乳糖苷酶Sca-1stemcellantigen-1干细胞抗原-1T-AOCtotalanti-oxidant总抗氧化能力1万方数据重庆医科大学硕士研究生学位论文当归多糖调控Wnt/β-catenin信号通路与延缓造血干/祖细

3、胞衰老机理的研究摘要目的干细胞衰老是生物体衰老的最新学说和老年性疾病的关键原因,寻找调控干细胞衰老的途径对延缓机体衰老和防治老年性疾病至关重要。造血干/祖细胞（HSC/HPCs）衰老与多种老年性疾病密切相关。我们已证明,当归多糖（ASP）是当归重要的抗衰老成分,采用“补血益气”途径能调控和延缓HSC/HPCs衰老；能拮抗和修复致衰剂对HSC/HPCs的损伤；能有效保护免疫系统和造血系统功能。迄今，ASP调控HSC/HPCs衰老的研究仅见本课题组报道，但其分子机理还不清楚。本课题将干细胞衰老最新理论和技术与中医学衰老理论和对干细胞认识紧密结合起来，通过构建HSC/HPCs体内/外衰老模型

4、，研究ASP延缓HSC/HPCs衰老与调控Wnt/β-catenin信号通路关键靶点的分子机制。方法1.小鼠造血干/祖细胞分离与鉴定：提取骨髓单个核细胞，免疫磁性分+选技术（MACS）分离、纯化骨髓Sca-1HSC/HPCs，流式细胞术鉴定分选细胞的纯度。+2.体外实验分五组：分离纯化的Sca-1HSC/HPCs分为：对照组；衰老2万方数据重庆医科大学硕士研究生学位论文模型组；信号通路阻断剂组；抗氧化剂组；ASP抗衰老组。分别处理各组细胞后检测以下指标：1）衰老相关生物学指标检测：①衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色；②细胞培养上清中晚期糖基化终产物（AGEs）含量检测，③

5、造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）培养；④衰老相关基因p16、p21mRNA及P16、P21、P53及Rb蛋白表达检测；2）氧化指标检测：①细胞内活性氧（ROS）水平与细胞总抗氧化能力（T-AOC）检测；②DNA和脂质氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)和4-羟基壬烯醛（4-HNE）含量检测；3）Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白与基因检测：包括β-catenin、GSK-3β蛋白表达和定位检测，β-catenin、GSK-3β、Phospho-GSK-3β、TCF-4表达检测，β-catenin、c-mycmRNA表达检测。3.体内实验分四组：小鼠随机分为，衰老模

6、型组；ASP衰老模型组；维生素E衰老模型组和对照组。分别处理各组小鼠，检测指标同体外实验。结果++1.分离纯化前Sca-1细胞为11.833.05%，经MACS分离纯化后Sca-1+细胞纯度为89.834.26%。表明分选后的Sca-1HSC/HPCs纯度高、活性良好。+2.体外实验结果表现：①衰老模型组与对照组比较，Sca-1HSC/HPCs的SA-β-Gal染色阳性细胞率提高，细胞培养上清中AGEs含量增加，CFU-Mix形成数量下降，衰老相关基因p16、p21mRNA及P16、P21、P53和Rb蛋白表达增加；ROS水平、8-OHDG和4-HNE含量上升，T-AOC下降；细胞

7、质β-catenin表达量增加，且向细胞核内转移增多；3万方数据重庆医科大学硕士研究生学位论文GSK-3β表达量减少；Phospho-GSK-3β及TCF-4蛋白，β-catenin及c-myc+mRNA表达增加。②信号通路阻断剂组与衰老模型组比较，Sca-1HSC/HPCs细胞质内β-catenin表达量减少，且细胞核内表达减少；GSK-3β表达量增加；Phospho-GSK-3β及TCF-4蛋白，β-catenin及c-mycmRNA表达减