猪伪狂犬重组抗原间接elisa诊断方法的建立

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1、万方数据ChineseJournalofVeterinaryMedicine中国兽医杂志2007年(第43卷)第5期3猪伪狂犬重组抗原间接ELISA诊断方法的建立樊淑华1，吴凤笋2，李文刚2，项朝荣3，韩勇3，王永立3(1．周口师范学院，河南周口466001；2．郑州牧业工程高等专科学校，河南郑州450011；3．河南农业大学，河南郑州450002)摘要：本研究应用重组抗原，成功建立了检测猪伪狂犬病病毒血清抗体的间接ELISA诊断方法。通过方阵滴定确定了抗原最适包被量为1．45ug／孔，血清最适稀释度为1：80，其作用时间

2、为60min，酶标抗体最适作用时间为60min。其阳性临界值为OD≥0．123。此外，该抗原不与猪其他疾病的阳性血清反应，具有良好的特异性；批内重复试验，变异系数小于10％。该方法与进口诊断试剂盒的符合率为96．3％。本研究为现地免疫猪群抗体检测和进行PRV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。关键词：猪伪狂犬病病毒；鉴别；诊断；间接ELISA中图分类号：$858．285．3文献标识码：A文章编号：0529—6005(2007)05—0003—02DevelopmentofanindirectELISAassayfo

3、rdetectingPorcineinfectiousanemiavirusAntibodywithrecombinantantigenFANShu—hual，WUFeng—sun2，LIWen—gangZ，XIANGChao—ron93，HANYon93，WANGYong—li3(1．ZhoukouNormalUniversity，Zhoukou466001，China；2．ZhengzhouCollegeofAnimalHusbandEngineering，Zhengzhou450011，China；3．HenanAg

4、riculturalUniversity，Zhengzhou450002，China)Abstract：WeutilizedrecombinantantigenanddevelopedanindirectELISAassayfordetectingPRVantibodies．Theoptimalcoatingconcentrationofantigenwas1．45弘gofPRVproteinperwell．Thedilutionofserawas1：80．．Thereactiontimeofserawas60min．Th

5、ereactiontimeofconjugatewas60min．ThestandardofjudgmentwasthatOD≥0．123waspositive．Furthermore，therecombinantantigenhadnocrossreactionwithotherseraofswinediseases，anditshowedthisassaywashighlyspecific．Intheintro—batchduplicativitytest，thevariationcoefficientiS1essth

6、an1O％．Theresultshowedtheassayhadgoodreplicativity．WhencomparedwiththecommercialKit，96．3％agreementwasobtained．TheapplicationofindirectELISAassaywouldprovideasimpleandrapidmeansofdetectinganti—PRVinmonitoringPRVinfectionorassessingvaccinationinthefield．Keywords：PPRV

7、；differentiation；diagnosis；indirectELlSACorrespondingauthor：LIWen-gang伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的多种动物和野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主要症状的疾病[1]。该病对猪危害最大，给养猪业造成了巨大的经济损失。在欧美等发达国家，主要采用基因缺失标志疫苗(MarkerVaccine)配合相应的血清学鉴别诊断方法来根除此病[2]，而在我国猪伪狂犬病的根除计划尚未启动。在大多数已启动伪狂犬病根除计划的国家中，主要采用针对gG，gE和收稿日期：

8、2006—07—19基金项目：河南省杰出人才创新基金资助项目(062100200)作者简介：樊淑华(1980一)，女，助教，硕士生，主要从事病毒分子生物学研究通讯作者：李文刚，E—mail：wengang—li@126．eomgC这3种糖蛋白的鉴别诊断方法，其中又以gE缺失的疫苗和gE—ELISA鉴别诊