《蛋白质共价结构》PPT课件

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1、第4章蛋白质的共价结构1蛋白质通论1.1形状和大小按形状和溶解度分类：纤维状蛋白质：角蛋白、丝蛋白、胶原蛋白不溶于水和稀盐溶液；结构作用。球状蛋白质：溶解性较好；功能多样。相对分子质量：6000到1x1061.2构象和组织层次构型：具有相同结构式的立体异构体中取代基在空间的相对取向。不同的构型间的转变需要共价键的断裂和重新形成。构象：具有相同结构式和相同构型的分子在空间里可能的多种状态。不同的构象间转变不需要共价键的断裂和重新形成。蛋白质的天然构象：每一种蛋白质至少有一种构象在生理条件下是稳定的，并具有生物活性的构象。结构层次：一级结构（1°）（

2、primarystructure)二级结构（2°）（secondarystructure）超二级结构（supersecondarystructure）结构域（structuraldomain）三级结构（3°）（tertiarystructure）四级结构（4°）（quarternarystructure）各个结构层次之间的关系可以作下列表示：一级结构→二级结构→超二级结构→结构域→三级结构→四级结构1.3蛋白质功能的多样性催化(酶)调节(激素、激活剂）转运（血红蛋白、膜转运蛋白）贮存（卵清蛋白）运动（肌动蛋白、肌球蛋白）结构成分（角蛋白、胶原蛋白

3、）防御和进攻（免疫球蛋白、蛇毒的溶血蛋白）P161-162荧光素酶血红蛋白（氧转运蛋白）角蛋白2蛋白质的一级结构一级结构（primarystructure):多肽链的氨基酸的序列。主要连接键：肽键肽链中的氨基酸由于形成肽键时脱水，已不是完整的氨基酸，所以称为残基肽健2.1肽键和肽肽键：反式构型二肽三肽四肽寡肽（oligopeptide）12个以上，20个以下氨基酸缩合而成多肽（Polypeptide）20个以上氨基酸缩合而成肽（peptide）：由两个或两个以上的氨基酸通过肽键连接而形成的化合物。肽链：氨基酸通过肽键连接起来而形成的链。氨基酸残基

4、氨基酸残基N端（游离的氨基）C端（游离的羧基）肽健肽健肽单位肽链书写方式：从左到右，N端→C端命名：根据氨基酸组成，由N端→C端命名为某氨酰某氨酰…某氨基酸丙氨酰谷氨酰甘氨酰赖氨酸Ala－Glu-Gly－Lys(orAEGK)2.2肽的化学性质双缩脲反应：肽和蛋白质特有的。含有两个或两个以上的肽键化合物与CuSO4碱性溶液生成紫红色或蓝紫色的复合物。用分光光度计测定蛋白质含量。2.3天然存在的活性肽活性肽（activepeptide）:有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在，通常都具有特殊的生理功能。①多肽激素②多肽抗菌素L-Leu-D-Phe-

5、L-Pro-L-ValL-OrnL-OrnL-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu短杆菌肽S(环十肽)由细菌分泌的多肽，有时也都含有D-氨基酸和一些非蛋白氨基酸。如鸟氨酸（Ornithine,缩写为Orn）。+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO-Met-脑啡肽+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO-Leu-脑啡肽③脑啡肽与真核生物的RNA聚合酶和牢固结合④鹅膏蕈碱CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOHCH2CH2CHNH2COOHCH2SH谷胱甘肽—存在与动、植物及微生物

6、中：1.参与体内氧化还原反应2.作为辅酶参与氧化还原反应保护巯基酶或含Cys的蛋白质中SH的还原性防止氧化物积累2GSHGS-SG⑤谷胱甘肽3蛋白质一级结构的测定①测定蛋白质分子中多肽链的数目②拆分蛋白质的多肽链③断开多肽链内的二硫桥④分析每一多肽链的氨基酸组成⑤鉴定多肽链的N-末端和C-末端残基⑥裂解多肽链成较小的片段⑦测定个肽段的氨基酸序列⑧重建完整多肽链的一级结构⑨确定半胱氨酸残基间形成的S-S交联桥位置Sanger于1953年第一个测定氨基酸序列---牛胰岛素（insulin）(获1958年诺贝尔化学奖)DNFB(2,4-二硝基氟苯)——

7、N末端2130蛋白质的N-末端或C-末端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量3.1测定蛋白质分子中多肽链数目3.2拆分蛋白质的多肽链和断开多肽链内的二硫桥①非共价键：血红蛋白（四聚体）断裂：8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍②二硫键：链内或链间还原：过量的β-巯基乙醇（pH8~9）保护巯基：烷基化试剂（碘乙酸）水解破坏肽健氨基酸混合物柱层析分离测定氨基酸（主要是酸水解，同时辅以碱水解）3.3氨基酸组成的分析氨基酸组成：用每摩尔蛋白质中含有氨基酸残基的摩尔数，或每100g蛋白质中含有氨基酸的克数来表示。3.4N末端和C末端氨基酸残基的鉴定(1)N末

8、端①2，4-二硝基氟苯（DNFB)法②丹磺酰氯（DNS)法③苯异硫氰酸酯（PITC)法④氨肽酶法DNFB弱碱性溶液中（DNP-蛋白质）黄